Ravekirina şertên biyolojiya molekulî ya bingehîn
1. cDNA û cccDNA: cDNA ADN-ya dubendî ye ku bi transkriptaza berevajî ya mRNAyê tê sentezkirin;cccDNA ADNya dorhêla girtî ya plazmîdî ye ku ji kromozomê azad e.
2. Yekîneya pêçandî ya standard: Yekîneya strukturê ya duyemîn a proteîn a-helix û β-sheet dikare bi navgîniya polîpeptîdên cûrbecûr yên girêdanê blokên strukturî yên bi rêgezên geometrîkî yên taybetî ava bike.Ji vê celebê pêçana diyarkirî re bi gelemperî strukturek super duyemîn tê gotin.Hema hema hemî strukturên sêyem dikarin bi van celebên pêçandî, û tewra celebên wan ên hevgirtî jî werin binav kirin, ji ber vê yekê ji wan re yekeyên pêçandî yên standard jî tê gotin.
3. CAP: adenosîn monofosfat cyclic (cAMP) proteîna receptor CRP (proteîna wergirê cAMP), kompleksa ku piştî berhevkirina cAMP û CRP pêk tê jê re proteîna çalakker CAP (proteîna çalakkirî cAMP) tê gotin.
4. Rêzeya palindromîk: Rêziya temamker a berevajî ya parçeyek parçeyek DNA, pir caran cîhek enzîmek sînordar.
5. micRNA: ARN-ya navbeynkar ya temamker an ARNya antîsens, ku temamkerê rêza mRNA ye û dikare wergerandina mRNA asteng bike.
6. Rîbozîm: ARN-ya bi çalakiya katalîtîk, ku di pêvajoya veqetandina ARNyê de roleke otokatalîtîk dilîze.
7. Motîf: Di avahîya fezayî ya molekulên proteîn de hin herêmên xwecihî hene ku bi şekl û topolojiya sê-alî ya mîna hev in.
8. Peptîdê sînyalê: peptîdeke bi 15-36 bermayiyên asîda amînî di dema senteza proteînê de li xala N-yê di dema senteza proteînê de rê dide transmembrana proteînê.
9. Atenuator: Rêzeke nukleotîdî ya di navbera herêmeke operator û geneke avahîsaziyê de ku transkrîpsiyonê diqedîne.
10. Xalê Magic: Dema ku bakterî mezin dibin û bi kêmbûna tam a asîdên amînoyî re rûbirû dibin, bakterî dê bersivek acîl çêbike da ku îfadeya hemî genan rawestîne.Nîşaneyên ku vê bersiva acîl çêdikin guanosine tetraphosphate (ppGpp) û guanosine pentaphosphate (pppGpp) ne.Rola PpGpp û pppGpp ne tenê yek an çend operon e, lê bandorê li hejmareke mezin ji wan dike, ji ber vê yekê ji wan re super-regulator an deqên efsûnî tê gotin.
11. Hêmana promotorê jorîn: vedigere rêza DNA ya ku di çalakiya promotor de rolek rêkûpêk dilîze, wek TATA li herêma -10, TGACA li herêma -35, zêdeker, û kêmker.
12. Lêpirsîna ADNyê: beşeke nîşankirî ya ADNyê ya bi rêzeke naskirî ye, ku bi berfirehî ji bo tespîtkirina rêzikên nenas û genên hedef tê bikaranîn.
13. Rêzeya SD: Rêzeya girêdana rîbozom û ARNyê ye, ku wergerê bi rê ve dibe.
14. Antîbody monoklonal: Antîpîdeke ku tenê li dijî yek diyarkerê antîgenîk tevdigere.
15. Kozmîd: Vektoreke ADNyê ya bi awayekî sûnî hatiye çêkirin e ku herêmên COS-ê yên li herdu dawiya fagê diparêze û bi plasmîdê ve girêdayî ye.
16. Nîşandana xala şîn-spî: Gena LacZ (b-galactosidase kod dike), enzîm dikare substrata kromojenîk X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galaktoside) hilweşîne û şîn çêbike, bi vî rengî şîn çêbike.Dema ku ADN-ya biyanî tê xêzkirin, gena LacZ nikare were îfade kirin, û zirav spî ye, da ku bakteriyên rekombînant were pîskirin.Ji vê re vekolîna şîn-spî tê gotin.
17. Elementa cis-çalak: Rêzek taybetî ya bazên di ADNyê de ku îfadeya genan bi rê ve dibe.
18. Enzîma Klenow: Parçeyeke mezin a ADN-yê polîmeraz I, ji bilî ku çalakiya 5' 3' exonukleazê ji holoenzîma ADN-ya polymerase I tê derxistin.
19. PCR ankor: ji bo zêdekirina ADN-ya balkêş bi rêzek naskirî li yek dawiya tê bikar anîn.Dûvikek poly-dG li yek dawiya rêzika nenas hate zêdekirin, û dûv re polî-dC û rêzika naskirî wekî destpêk ji bo zêdekirina PCR-ê hatin bikar anîn.
20. Proteîna fusion: Gena proteîna eukaryotî bi gena exogenous ve girêdayî ye û proteîna ku ji wergera proteîna genê ya orîjînal û proteîna exogenous pêk tê di heman demê de tête diyar kirin.
Peyvên din ên biyolojiya molekulî
1. Nexşeya fizîkî ya ADN-ê ew rêza ku perçeyên molekula ADNyê (endonukleazên sînordarkirî) li hev hatine rêzkirin.
2. Parçebûna RNase li ser du celeb (otokatalîz) û (heterokatalîz) tê dabeş kirin.
3. Di prokaryotan de sê faktorên destpêkirinê hene (IF-1), (IF-2) û (IF-3).
4. Proteînên transmembrane hewceyê rêberiyê (peptîdên sînyalê) ne, û rola şaperonên proteîn ev e (alîkarî dike ku zincîra peptîdê bikeve nav pêkhateya xwemalî ya proteînê).
5. Hêmanên di promotoran de bi gelemperî dikarin li ser du celeban bêne dabeş kirin: (hêmanên pêşverû yên bingehîn) û (hêmanên pêşverû yên jorîn).
6. Naveroka lêkolînê ya biyolojiya molekulî bi giranî sê beşan pêk tîne: (biyolojiya molekulê ya avahîsaz), (îfadekirina genan û rêzikname), û (teknolojiya ji nû vekombînasyona DNA).
7. Du ceribandinên sereke yên ku nîşan didin ku DNA materyalê genetîkî ye ev in (enfeksiyona pneumococcus a mişkan) û (enfeksiyona fagê T2 ya Escherichia coli).qaweta veşartî).
8. Di navbera hnRNA û mRNA de du ciyawaziyên sereke hene: (hnARN di pêvajoya veguhertina mRNA de tê parçekirin), (dawiya 5' ya mRNAyê bi kapek m7pGppp tê zêdekirin, û li dawiya 3' ya dûvika mRNA asîdê (polyA) poladenylasyonek zêde heye).
9. Awantajên forma proteînê ya pir-binbeş ev in (binbeşek ji bo karanîna ADNyê rêbazek aborî ye), (kare bandora xeletiyên rasthatî yên di senteza proteînê de li ser çalakiya proteînê kêm bike), (çalakî dikare pir bikêrhatî be û bi lez têne vekirin û girtin).
10. Naveroka sereke ya mekanîzmaya pelçiqandina proteînan teoriya nucleasyona yekem (nukleasyon), (dewlemendkirina strukturel), (vesazkirina dawîn) pêk tîne.
11. Galaktoz bandorek dualî li ser bakteriyan dike;ji aliyekî ve (ew dikare wekî çavkaniyek karbonê ji bo mezinbûna hucreyê were bikar anîn);ji aliyê din ve (ew jî beşek ji dîwarê şaneyê ye).Ji ber vê yekê, promotorek cAMP-CRP-serbixwe S2 ji bo senteza domdar a di asta paşîn de hewce ye;di heman demê de, promotorek bi cAMP-CRP-girêdayî S1 hewce ye ku ji bo verastkirina senteza-asta bilind.Veguheztin ji (S2) bi G û ji (S1) bê G dest pê dike.
12. Teknolojiya ADN ya rekombînant jî wekî (klonkirina genê) an jî (klonkirina molekulî) tê zanîn.Armanca dawîn ev e (veguheztina DNA-ya agahdariya genetîkî ya di organîzasyonek nav organîzmek din).Ezmûnek nûvekombînasyona DNA ya tîpîk bi gelemperî van gavan vedihewîne: (1) Gena armanc (an jî genê exogenous) yê organîzmaya bexş derxîne, û bi enzîmatî wê bi molekulek DNA ya din (vektora klonkirinê) ve girê bide da ku molekulek nû ya ADN-ya rekombînant ava bike.② Molekula ADN-ya rekombînant di şaneya wergir de tê veguheztin û di şaneya wergir de dubare dibe.Ji vê pêvajoyê re veguherîn tê gotin.③ Wan şaneyên wergir ên ku ADN-ya rekombînant vehewandine bişopînin û nas bikin.④ Şaneyên ku ADN-ya rekombînant dihewîne bi mîqdarên mezin biçînin da ku diyar bikin ka gena arîkariya biyanî diyar e.
13. Du cureyên dubarekirina plasmîdê hene: ji yên ku bi hişkî bi senteza proteîna şaneya mazûvan têne kontrol kirin (plazmîdên teng) û yên ku bi hişkî ji hêla senteza proteîna şaneya mêvandar ve nayên kontrol kirin, jê re dibêjin (plasmîdên rehet).
14. Sîstema reaksiyona PCR divê şertên jêrîn hebin: a.primerên ADNyê (nêzîkî 20 baz) bi rêzikên temamker ên li her dawiya du rêzikên gena hedefê yên ku ji hev têne veqetandin.b.Enzîmên bi îstîqrara germî wek: TagDNA polymerase.c, dNTPd, rêza DNA ya balkêş wekî şablon
15. Pêvajoya reaksiyonê ya bingehîn a PCR sê qonaxan pêk tîne: (denaturasyon), (pêkvekirin), û (dirêjkirin).
16. Pêvajoya bingehîn a heywanên transgenîk bi gelemperî ev e: ①Destpêkirina genê biyanî yê klonkirî di nav nucleusa hêkek fertilîzekirî an şaneya stem a embryonîk de;②Veguheztina hêka fertilîzekirî an jî şaneya stem a embryonîk di malzaroka jinê de;③ Pêşveçûn û mezinbûna embrîyonî ya temam Ji bo dûndana bi genên biyanî;④ Van heywanên ku dikarin proteînên biyanî hilberînin wekî stokên mezinbûnê bikar bînin da ku xetên homozygot nû çêkin.
17. Xetên xaneyên hîbrîdomayê bi hîbrîdîzekirina şaneyên (B) bi şaneyên (myeloma) re çêdibin, û ji ber ku (şaneyên zirav) dikarin hîpoksantînê bikar bînin û (şaneyên hestî) fonksiyonên dabeşkirina şaneyê peyda bikin, ew dikarin di navgîna HAT de werin mezin kirin.mezinbûn.
18. Bi kûrbûna lêkolînan re, ji nifşa yekem a antîbodîyan re (antîbodîkên poliklonal), ji nifşê duyemîn (antîbodîyên monoklonal), û ji nifşê sêyem (antîbodîyên endezyariya genetîkî) re tê gotin.
19. Heya nuha, endezyariya genetîkî ya vîrusên kêzikan bi giranî li ser baculovirus, ku di danasîna (genê toksînek exogenous) de diyar dibe;(genên ku çerxa jiyana normal a kêzikan têk didin);(guhertina genên vîrusê).
20. Faktorên proteîna trans-çalak ên ku bi hêmanên hevpar TATA, GC, û CAAT re di promotorê RNA polîmeraza II ya mammalan de ne (TFIID), (SP-1) û (CTF/NF1) ne.
bîst û yek.Faktorên veguherîna bingehîn a RNA polymerase Ⅱ, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E ne, û rêza girêdana wan ev e: (D, A, B, E).Li ku derê fonksiyona TFII-D (bi qutiya TATA ve girêdayî ye).
bîst û du.Piraniya faktorên veguheztinê yên ku bi ADNyê ve girêdidin di forma dimeran de dixebitin.Qadên fonksiyonel ên faktorên veguheztinê yên ku bi DNA ve girêdidin bi gelemperî jêrîn in (helix-turn-helix), (motîfa tiliya zinc), (bingeh-leucîn) motîfa zipperê).
bîst û sê.Sê celeb awayên veqetandina endonukleaza sînordarkirinê hene: (li aliyê 5'yê teşeya simetrîyê tê birrîn da ku 5' dawiya asê çêbike), (li aliyê 3' yê xêza hevsengiyê tê qutkirin da ku 3' dawiya asê çêbike (ji bo ku beşên şênber biafirîne)
bîst û çar.ADNya plazmîdê sê veavakirinên cihêreng hene: (veavakirina SC), (veavakirina oc), ( veavakirina L).Yekem di elektroforez de (veavakirina SC) ye.
25. Pergalên derbirrîna genên derve, bi giranî (Escherichia coli), (hevîrtirşk), (kêzik) û (tabloya xaneyên memikan).
26. Rêbazên ku bi gelemperî ji bo ajalên transjenîk têne bikar anîn ev in: (rêbaza enfeksiyona retroviral), (rêbaza mîkroderzkirina DNA), (rêbaza şaneyên stem ên embryonîk).
Application Biyolojiya Molecular
1. Karên ji 5 ARN'yan zêdetir bi nav bike?
RNA veguheztin tRNA Asîda amînî Veguhast RNA RNA Rîbozom ARN-a peyamberê pêk tîne Şablonek hevsengiya proteîna mRNA RNA-ya navokî ya heterojen hnRNA Pêşniyara mRNA-ya gihîştî RNA-ya nukleerî ya piçûk snRNA Di veqetandina hn-RNA de Tevlî ARN-ya piçûk a sîtoplazmîk scRNA/7macallo-arnn-ya ji nû ve hatî nîşankirin. RNA antîsens anRNA/micRNA Vebêja genê rêkûpêk dike Ribozyme RNA ARNya çalak a enzîmatîk
2. Cûdahiya sereke di navbera prokaryotic û prokaryotic promotors de çi ye?
Prokaryotic TTGACA --- TATAAT------ Malpera Destpêkirinê-35 -10 Enhancer Eukaryotî---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Malpera Destpêkê-110 -70 -25
3. Aliyên sereke yên avakirina sûnî yên plasmîdên xwezayî çi ne?
Plazmîdên xwezayî bi gelemperî kêmasiyên xwe hene, ji ber vê yekê ew ji bo karanîna wekî hilgirên endezyariya genetîkî ne guncaw in, û divê bêne guheztin û çêkirin: a.Genên nîşankerên hilbijartinê yên maqûl lê zêde bikin, wek du an bêtir, ku ji bo hilbijartinê hêsan têne bikar anîn, bi gelemperî genên antîbiyotîk.b.Cihên qutkirina enzîmê yên minasib zêde bikin an kêm bikin da ku ji nûvekombînasyonê hêsan bikin.c.Dirêjiyê kurt bikin, perçeyên nehewce qut bikin, karbidestiya importê baştir bikin û kapasîteya barkirinê zêde bikin.d.Replikonê biguhezînin, ji teng berbi berbelav, ji kopiyên kêmtir berbi kopiyên zêdetir.e.Li gorî hewcedariyên taybetî yên endezyariya genetîkî hêmanên genetîkî yên taybetî zêde bikin
4. Mînakek rêbazek ji bo vekolîna cihêreng a cDNA-ya tevnvîsê bide?
Du nufûsên şaneyê têne amadekirin, gena armanc di yek ji şaneyan de tê xuyang kirin an pir zêde tête diyar kirin, û gena armanc di şaneya din de ne diyar an kêm tê xuyang kirin, û dûv re bi hîbrîdkirin û berhevdanê gena armanc tê dîtin.Mînakî, di dema rûdan û pêşkeftina tumoran de, şaneyên tumor dê mRNA bi astên vegotinê yên cihêreng ji şaneyên normal pêşkêşî bikin.Ji ber vê yekê, genên girêdayî tumorê dikarin bi hîbrîdîzasyona cihêreng werin vekolandin.Rêbaza inductionê di heman demê de dikare were bikar anîn da ku genên ku derbirîna wan têne derxistin were şûştin.
5. Çêkirin û nîşankirina xetên hucreyên hybridoma?
Hucreyên B-ya spleen + hucreyên myeloma, polîetîlen glycol (PEG) lê zêde bikin da ku tevhevbûna hucreyê pêşve bibin, û hucreyên fusiona B-myeloma splenic ku di navgîniya HAT de (di nav xwe de hîpoxanthine, aminopterin, T heye) zêde dibin.Di hevketina şaneyê de ev hene: Şaneyên hevgirtinê yên zirav-pişk: nikarin mezin bibin, şaneyên zirav in vitro nayên çandin.Hucreyên tevhevkirina hestî-hestî: nikarin hîpoxanthine bikar bînin, lê dikarin purine di riya duyemîn de bi karanîna reductase folate sentez bikin.Aminopterin reductase folate asteng dike û ji ber vê yekê nikare mezin bibe.Hucreyên tevhevkirina hestî-pişk: dikarin di HAT de mezin bibin, hucreyên spêle dikarin hîpoxanthine bikar bînin, û hucreyên hestî fonksiyona dabeşkirina hucreyê peyda dikin.
6. Prensîb û rêbaza diyarkirina avahîya seretayî ya ADNyê bi rêbaza dawîkirina termînalê dideoksî (rêbaza Sanger) çi ye?
Prensîb ev e ku meriv termînatorek zincîra nukleotîd-2,,3,-dîdeoksînukleotîd bikar bîne da ku dirêjkirina DNAyê bi dawî bike.Ji ber ku ew 3-OH ya ku ji bo avakirina girêdanên 3/5/phosphodiester hewce dike tune ye, gava ku di zincîra ADN-yê de were girêdan, zincîra DNA nikare bêtir were dirêj kirin.Li gorî prensîba berhevkirina bingehê, gava ku DNA polymerase hewce dike ku dNMP beşdarî zincîra DNA ya normal dirêjkirî bibe, du îhtîmal hene, yek beşdarbûna ddNTP-ê ye, ku di encamê de dirêjkirina zincîra deoksînukleotidê bi dawî dibe;ya din jî beşdarbûna di dNTP de ye, da ku zincîra DNA hîn jî dirêj bibe heya ku ddNTP-ya din were tevlê kirin.Li gorî vê rêbazê, komek perçeyên DNA yên bi dirêjiyên cihêreng ên ku bi ddNTP-ê diqedin dikarin werin bidestxistin.Rêbaz ev e ku bi rêzdarî ddAMP, ddGMP, ddCMP, û ddTMP li çar koman were dabeş kirin.Piştî reaksiyonê, elektroforeziya gel a polyacrylamide dikare rêza DNA li gorî bandên avjeniyê bixwîne.
7. Bandora rêziknameya erênî ya proteîna aktîvator (CAP) li ser transkripsiyonê çi ye?
Proteîna receptorê adenîlat a cyclic (cAMP) CRP (proteîna wergirê cAMP), kompleksa ku ji berhevkirina cAMP û CRP pêk tê, jê re CAP (proteîna cAMP çalakkirî) tê gotin.Dema ku E. coli di navgînek bê glukozê de tê mezin kirin, senteza CAP zêde dibe, û CAP fonksiyona çalakkirina promotorên wekî laktozê (Lac) heye.Hin promotorên girêdayî CRP ne xwedî taybetmendiya rêzika herêmê ya tîpîk -35 (TTGACA) ya ku promotorên hevpar hene.Ji ber vê yekê, zehmet e ku RNA polymerase bi wê ve girêdayî ye.Hebûna CAP (fonksiyonê): dikare bi girîngî domdariya girêdana enzîm û promotor çêtir bike.Ew bi giranî du aliyên jêrîn nîşan dide: ① CAP ji molekula enzîmê re dibe alîkar ku bi guheztina konforma promotor û pêwendiya bi enzîmê re rast rêve bibe, da ku bi herêma -10 re were hev kirin û rola cîhgirtina fonksiyona herêma -35 bilîze.②CAP di heman demê de dikare girêdana RNA polymerase bi deverên din ên DNA-yê re asteng bike, bi vî rengî îhtîmala girêdana bi promotorê wê yê taybetî re zêde bike.
8. Bi gelemperî di ceribandinek nûvekombînasyona DNA ya tîpîk de çi gav têne girtin?
yek.Genê armanc (an jî genê eksogenous) yê organîzmaya xêrxwaz derxînin, û bi enzîmatîk wê bi molekulek DNA ya din (vektora klonkirinê) ve girêdin da ku molekulek nû ya ADN-ya rekombînant ava bikin.b.Molekula ADNyê ya vejenê vediguhêze nav şaneya wergir û dubare dike û di şaneya wergir de diparêze.Ji vê pêvajoyê re veguherîn tê gotin.c.Ew şaneyên wergir ên ku ADN-ya rekombînant kişandine pîvaz bikin û nas bikin.d.Şaneyên ku ADN-ya rekombînant dihewîne kom dikin da ku diyar bikin ka gena arîkariya biyanî diyar e an na.
9. Çêkirina pirtûkxaneya genê Sê rêbaz ji bo vekêşana rekombînantan têne dayîn û pêvajo bi kurtî tê vegotin.
Nîşandana berxwedanê ya antîbiyotîk, neçalakkirina berxwedanê ya binavkirî, vekolîna deqên şîn-spî an verastkirina PCR, vekolînên cûda, lêkolîna DNA Piraniya vektorên klonkirinê genên berxwedana antîbiyotîk (antî-ampicillin, tetracycline) digirin.Dema ku plasmîd di nav Escherichia coli de tê veguheztin, bakterî dê berxwedanê bistînin, û yên bêyî veguheztin dê nebin xwedî berxwedan.Lê nikare ferq bike ka ji nû ve hatiye organîzekirin an na.Di vektorek ku du genên berxwedanê vedihewîne, heke perçeyek DNA ya biyanî têxe nav yek ji genan û bibe sedema ku gen bêçalak bibe, du kontrolên plakaya ku dermanên cihêreng vedigirin dikarin werin bikar anîn da ku ji nûvekombînantên erênî ve were şopandin.Mînakî, plasmidê pUC gena LacZ (b-galactosidase kod dike) dihewîne, ku dikare substrata kromojenîk X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galaktoside) hilweşîne da ku şîn çêbike, bi vî rengî tîrêjê şîn bibe.Dema ku ADN-ya biyanî tê xêzkirin, gena LacZ nikare were diyar kirin, û zirav spî ye, da ku bakteriyên rekombînant werin pîvaz kirin.
10. Pêvajoya bingehîn a bidestxistina ajalên transjenîk bi şaneyên stem ên embryonîk vebêje?
Hucreyên stem ên embryonîk (ES) di dema pêşkeftina embryonîk de şaneyên embryonîk in, ku dikarin bi sûnî bêne çandin û zêdekirin û fonksiyona cûdabûna nav celebên hucreyên din hene.Çandiniya şaneyên ES: Girseya hucreya hundurîn a blastocystê tê veqetandin û çandin.Dema ku ES di qatek bê-xwarinê de tê çandin, ew ê di nav hucreyên fonksiyonel ên cihêreng ên wekî hucreyên masûlkeyê û hucreyên N de cûda bibe.Dema ku di navgînek ku fibroblast tê de tê çandin, ES dê fonksiyona cûdabûnê biparêze.ES dikare bi genetîkî were manîpule kirin, û fonksiyona cihêrengiya wê dikare bê entegre kirin bêyî ku bandorê li fonksiyona cihêrengiya wê bike, ku pirsgirêka yekbûna rasthatî çareser dike.Genên exogenous têxin nav şaneyên stem ên embryonîk, paşê di malzaroka mişkên mê yên ducanî de biçînin, çêdibin çêdikin û ji hev derbas dibin da ku mişkên homozîgot bistînin.
