Pêşkêş:

ARN, navê zanistî asîda ribonukleîk, kurteya wê ji RiboNucleic Acid tê, celebek asîda nukleîk e ku bi kêmî ve bi dehan rîbonukleotîdan bi girêdanên fosfodîester ve tê girêdan.

Pêşniyara vekolîna ARNyê derxistina ARNya tevayî ya bê gemarî ye, û prensîba bingehîn a derxistina ARNyê bi giranî wiha dikare were kurt kirin:

1. Pêşî şaneyan bişkînin

2. Dûv re nepaqijiyên makromolekuler (proteîn, lîpîd, DNA, hwd.) ji holê rakin.

3. Di dawiyê de, RNA dema ku xwê û halên organîk ji holê radike, û ARNyê bêtir paqij dike, tê rijandin.

Rêbaza derxistina berê û niha

Nifşa yekem a rêbaza derxistina RNA rêbaza barînê ya TRIzol e (reagentên ku têne bikar anîn guanidine isothiocyanate, fenol, kloroform, hwd.) ku ji hêla bapîrê bi navê Piotr Chomczynski û dapîra Nicoletta Sacchi ve hatî vedîtin, ji ber ku ev îcad rê dide derxistina RNA-yê bi lez û bez, lêkolîna ARNyê ji hingê ve dest pê kiriye.

Dûv re, Bapîr ev patenta firot Invitrogen, û Invitrogen ev rêbaz li cîhanê belav kir û bû rêbazek pir tê bikar anîn.

Dûv re, Invitrogen ji hêla Thermo ve hate bidestxistin!

Hilbera nûner: Reagenta TRIZol ya Invitrogen

Lêbelê, rêbaza barîna TRIzol pêdivî ye ku pir barîn û derxistina RNA-yê hewce bike, û reagentên ku têne bikar anîn jehrîn in û demek dirêj dixebitin.

Ji ber vê yekê, rêbaza paqijkirina stûn-enzîmê ya nifşê duyemîn derket holê, ku parzûna silicagelê wekî materyalek adsorpsiyonê ya asîda nukleîk bikar tîne da ku dema ku nepaqijiyên din jê dike vegerandina RNA-yê di nimûneyê de zêde bike.

Rêbaza nifşa duyemîn operasyonê li ser bingeha performansa domdar hêsan dike, faktora xetereyê kêm dike, û karîgeriya derxistina RNA çêtir dike.

Berhemên nûner: QIAGEN RNeasy û piraniya hilberên navxweyî

Lêbelê, hem rêbazên nifşa yekem û hem jî ya duyemîn hewce dike ku DNase bikar bîne da ku gemariya DNA-yê jê bibe, ku ev yek ji ceribandinên jêrîn ên paşîn re hin nerehetiyê tîne.DNase ya mayî dê karbidestiya veguheztina berevajî kêm bike û senteza cDNA-ya yekem kêm bike, bi vî rengî bandorê li rastbûna encaman bike.

Ji ber vê yekê, rêbaza derxistina nifşa sêyemîn li ser bingeha nifşa duyemîn xweşbîn e.Ji bo ceribandinê ne hewce ye ku tu enzîman lê zêde bike, û RNA tenê bi du stûnan bi hêsanî dikare were bidestxistin.

Stûn 1: Stûna Paqijkirina ADN-ê ji bo paqijkirina DNA

Stûna 2: Stûna tenê-ARN-ê bi taybetî ARN-ê vedigire û vedigerîne

Operasyonek wusa hêsan ne tenê wextê xilas dike, lê di heman demê de xebata ceribandinên jêrîn jî hêsantir dike!

Berhemên nûner: QIAGEN RNeasy Plus ûForegeneBerhemên rêza paqijkirina RNA

(RNeasy Plus)

(Foregene'sKîta îzolasyona RNA ya tevahî ya nebatê)

Bi bêdengî ji te re bêje!Kita RNA ya Foregene di heman demê de Eraserek RNase ya pir hêsan-karanîna wê jî pêşkêşî dike, ku dikare di 1 hûrdemê de 400 μg RNase li ser rûyê hişk bi tevahî derxîne, bêyî ku maddeyên jehrîn li laşê mirov zêde bike!

Pic1: Tabloya berhevdana pêvajoya operasyonê

Berhemên Foregene dikarin tenê di du stranan de derxistina RNA temam bikin, kesên din ji pêşkeftina ceribandina we çavnebar nekin!

Pic2:Eencamên ezmûnî nexşeya berhevdanê

Nifşa yekem (1: TRIzol)

Nifşa duyemîn (2: RNeasy ya QIAGEN)

Nifşa sêyemîn (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pic3: Grafika qPCR (grafika kemera zêdekirinê)

Nifşa yekem (kesk tê wateya TRIzol -, sor tê wateya TRIzol +)

Nifşa duyemîn (şîna ezmanî tê wateya QIAGEN RNeasy-, sor tê wateya QIAGEN RNeasy +)

Nifşa sêyemîn (şîn tê wateya QIAGEN RNeasy plus, kesk tê wateya Foregene)

(Têbînî: grafika qPCR "-" nîşan dide ku DNase nehatiye zêdekirin û tevliheviya DNA nehatiye rakirin. Ji ber vê yekê, CT bilindtir e û encam ne rast e; "+" nîşan dide ku DNase hatiye zêdekirin û gemariya DNA ji holê hatiye rakirin, encam rast e)

Her nûvekirinek teknîkî tê vê wateyê ku operasyona ceribandinê bi rêgezek hêsantir û bikarhêner-hevaltir pêşve diçe.

Foregene armanc dike ku ji lêkolînerên bêtir zanistî re bibe alîkar ku dem û lêçûna ceribandinê xilas bikin, encamên ceribandina kalîteya bilind bistînin, û bi hev re destkeftiyên lêkolîna zanistî yên hêja biafirînin.