Nivîskar: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Yekîne: Nexweşxaneya Jiaozhou, Nexweşxaneya Dongfang ya girêdayî Zanîngeha Tongji

Heya nuha, celebê nimûneya sereke ya ji bo tespîtkirina asîda nukleîk a pathogenê respirasyonê şûşa qirikê ye.Gelek cûrbecûr çareseriyên parastinê yên nimûneyê yên bi gelemperî têne bikar anîn hene, ku hemî ji bo veguheztin û hilanînê hewce ne ku werin sarinckirin an cemidandin;Zehmet e ku meriv tevahiya pêvajoya germahiya nizm di dema berhevkirin û veguheztinê de kontrol bike, û dijwar e ku meriv berî ceribandina nimûneyê kontrolkirina kalîteyê piştrast bike.^[1-2].

RNase (RNase) endonukleazek e ku ARNyê hîdrolîz dike, bi giranî girêdanên fosfodîsterî yên di navbera nukleotîdan de qut dike.Molekula RNase pir bi îstîqrar e, di strukturê de girêkên dîsulfîdê hene, û çalakiya wê hewcedarî hebûna kationên duvalent nake, ji ber vê yekê RNase bi hêsanî nayê denaturîzekirin, û piştî germahiya bilind an karanîna denaturantan jî ji nû ve vejenê hêsan e.RNase li ser yên endojen û biyanî têne dabeş kirin.RNazên endojen dikarin di heman demê de dema ku şaneyên diqelişîn de werin berdan.Ji ber vê yekê, rakirina rola RNasesên endogenous di pêvajoya derxistina RNA de gavek pir girîng e.RNasên eksogenous bi berfirehî têne belav kirin.RNase di hewa, çermê mirovan, por û saliva de hene, ku sedemên girîng ên hilweşîna hêsan a RNA ne.^[3].

Lêpirsîna daneyê

CANS-CL02-A009 "Serpandina Rêbernameyên Qebûlkirina Qalîteya Laboratuwara Bijîjkî û Desthilatdariya Di Qada Teşhîsa Molekular de" di daxwazên teknîkî de pêşniyar dike ku standardên kalîteya avê yên guncav li gorî serîlêdanê bêne formule kirin;Konteynerên hewayê yên yekcarî:

RNase / Tesnîfkirin

(1) RNase A

Ribonukleaz A (RNase A), ku ji pankreasê gawir tê, endoribonukleazek e ku dikare bi taybetî êrîşî dawiya 3' ya bermahiyên pyrimidine ya li ser RNA bike, sîtosîn an uracilê ku ji hêla nukleotîdên cîran ve hatî çêkirin qut bike.Girêdana fosfodîester, berhema dawî ya reaksiyonê 3 'nukleotîdek pîrîmîdîn û oligonukleotîdek e ku di dawiyê de nukleotîdek pîrîmîdîn a 3' ye.

(2) RNase T1

Ribonukleaza T1 (RNase T1) ji Aspergillus orjzae hatiye wergirtin, ew bi taybetî li ser fosfata 3'-termînala guanînê tevdigere, û cihê veqetandinê di navbera 3'fosfata guanînê û 5' hîdroksîl a nukleotîdên cîran de ye.Hilbera dawîn a reaksiyonê 3 'acida guanylîk û perçeyên oligonukleotîdê ye ku di dawiyê de asîda 3'guanylîk e.

(3) RNase H

Ribonukleaza H (RNase H) yekem car ji tevna tîmusê golik hat keşfkirin, û gena wê ya kodker di nav Escherichia coli de hatiye klon kirin.Ew dikare bi taybetî DNA-yê hilweşîne: Rêzên RNA yên di dupleksên hîbrîd ên RNA de, di encamê de oligonukleotîd û mononukleotîdên bi 3'-OH û 5'-monofosfat dawiya wan çêdibe, ew nikare ADN an ARN-ya yek- an du-zindî hilweşîne.

RNase

Fonksiyon û bikaranîn

Ribonukleaz dikare hilweşandina asîda ribonukleîk (RNA) katalîz bike û dikare bi sûnî were sentez kirin.Ji bo dermankirina trawmayê û êşa movikan rûnê dermanî bi cihkî tê bikar anîn.Li gorî raporan, rîbonukleaz dikare metabolîzma hucreya mêvandar biguhezîne, senteza vîrusê asteng bike, belavbûna virusa înfluensayê di in vitro de asteng bike, û di embrîyoyên mirîşkan de avakirina vaksîniya û virusa herpesê asteng bike.Bikaranîna klînîkî ya rîbonukleazê derziya rojane ya 180 mg ya intramuskuler, sûdmend e ji bo dermankirina encefalîtê serpêhatî, ribonukleaz dikare hilweşîna asîda ribonukleîk (RNA) katalîz bike, û naha dikare bi sûnî were sentez kirin.Ji bo dermankirina trawmayê û êşa movikan rûnê dermanî bi cihkî tê bikar anîn.Li gorî raporan, rîbonukleaz dikare metabolîzma hucreya mêvandar biguhezîne, senteza vîrusê asteng bike, belavbûna virusa înfluensayê di in vitro de asteng bike, û di embrîyoyên mirîşkan de avakirina vaksîniya û virusa herpesê asteng bike.Bikaranîna klînîkî ya rîbonukleazê derzîlêdana rojane ya 180 mg ya intramuskuler ji bo dermankirina encephalitis epîdemîk bikêr e.

RNase

Pênaseya Inhibitor

Pênaseya yekeya frenker a RNase: Mîqdara enzîma ku ji bo astengkirina %50 ji çalakiya 5ng RNase A hewce dike yek yekîneyek e.

Inhibitors RNase çawa dixebitin

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate pêkhateyek organîk e ku bi formula molekularî C2H6N4S e.Bi giranî di dermanê biyolojîkî, reagentên kîmyewî, hwd de tê bikar anîn. Guanidine isothiocyanate ajanek lîzkirina proteîn e, û ew pir caran wekî pêkhateya sereke ya çareseriya lîzê di reagentên tespîtkirina molekulî de tê bikar anîn.Ew dikare tevnê lîz bike, avahiya hucreyê hilweşîne û asîdê nukleîk ji nukleoproteînê veqetîne, û xwedan denaturasyonek xurt a RNase ye.Ew mêldarê RNase ya herî bi bandor e.

TRIZol reagentek nûvekirina RNA-ya tevahî ya nû ye ku dikare rasterast RNA-ya tevahî ji hucre an tevnek derxe.Ew maddeyên wekî fenol û guanidine isothiocyanate dihewîne, ku dikare zû hucreyan têk bibe û nukleazên ku ji hêla hucreyan ve têne berdan asteng bike.

(Lêbelê, guanidine isothiocyanate ji bo tenduristiya lêkolînerên laboratorê xeternak e.)

RNasin:

Acid glycoprotein ji kezeba mişk an blastoderma mirovan tê derxistin.Rnasin astengkerek ne-hevrikî ya RNase ye, ku dikare bi RNase-ên cihêreng ve girêbide da ku wan neçalak bike.

(Zêdetir hûrgulî: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hgermahiya bilind:

Germahiya bilind di heman demê de amûrek hevpar a denaturasyona proteînê ye.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC înhîbîtorek RNase ya bihêz lê netemam e, ku dikare çalakiya RNase asteng bike bi zengila imidazole amîno asîdê ya koma çalak a RNase re ku proteînan denature bike.

Kompleksa vanadyl ribonucleoside:

Kompleksek ku ji hêla îyon û nukleozîdên oksîdê vanadyûmê ve hatî çêkirin, ku di forma madeyên veguhêz de bi RNase ve girêdide, ku hema hema bi tevahî dikare çalakiya RNase asteng bike.

yên din:

SDS, urea, erda diatom û hwd jî li ser RNase xwedî bandorek mêtînger e.

Reviews Pispor

Li Yujie Serek Teknîsyen

Rêvebirê Beşa Laboratoriyê, Nexweşxaneya Jiaozhou, Nexweşxaneya Dongfang ya girêdayî Zanîngeha Tongji

Ji bo ku pêşî li hilweşandina biyolojîk a RNase ya biyanî were girtin, di pêvajoya derxistina RNA de divê mask, destik û şepik gelek caran li xwe werin girtin û biguhezînin.Pêdivî ye ku hemî şûşeyên şûşê di tendûrek zuwakirinê de di germahiya 200 ° C de ji 2 demjimêran zêdetir werin pijandin.Materyalên ku ji bo pijandinê têne bikar anîn, wekî plastîk, pêdivî ye ku bi ava DEPC were derman kirin, û dûv re bi ava distîlkirî were şûştin.Reagent an amûrên ku ji bo derxistin, parastin û naskirina ARNyê têne bikar anîn divê ji RNA re bêne veqetandin, û herêmek xebata RNA ya serbixwe were saz kirin.

referans:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakterî û vîrusên di nasopharynx de yekser beriya destpêkirina enfeksiyonên tîrêjê yên tîrêjê di zarokên xwecihî yên Avusturalya de[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Şaxa Kontrolkirina Enfeksiyonê ya Nexweşxaneyê ya Komeleya Dermanê Pêşîlêgir a Chineseînî.Rêbernameyên ji bo berhevkirin û kontrolkirina nimûneyên mîkrobîkî yên klînîkî [J].Kovara Çînî ya Enfeksiyona Nexweşxaneyê, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Testa Klînîkî Bi Deh Hezar Çima Berhema Biyolojiya Molekularî"