Di qonaxa destpêkê ya reagentên PCR de verastkirina performansa primer û sondajan û destnîşankirina şert û mercên reaksiyonê yên herî guncaw şert e ku pêşkeftina birêkûpêk a ceribandinên fermî misoger bike.
Ji ber vê yekê em çawa hewce ne ku di qonaxa destpêkê de sondaya primer piştrast bikin?
Nîşaneyên bingehîn xêza bingehîn, kêşeya amplification, nirxa ct, karbidestiya amplification, tespîtkirina nimûneya nizm, CV, hwd.
Baseline
Xeta bingehîn di kêşeya zêdekirina PCR de xeta horizontî ye.Di çend çerxên pêşîn ên reaksiyona zêdekirina PCR de, sînyala floransê zêde naguhere û xêzek rast çêdike.Ev xêza rast xeta bingehîn e.
Dema ku sondajên PCR-ya primer dişopînin, bala xwe bidin ka xeta bingehîn astî ye.Paqijiya kombûna sondaya primerê dê bandorê li ser xeta bingehîn bike, wek ku dibe sedema ku xeta bingehîn bilind bibe an dakeve.Rêzeya bingehîn jî nîşanek pir xwerû ye.
Amplification Curve
Nîşanek din a întuîtîv şeklê keviya zêdebûnê ye.Çêtir e ku meriv xwedan kelekek bi teşeya S-yê be da ku ji zêdekirina duyemîn an kêşeyên din ên zêdekirina nenormal dûr bikevin.
Nirxa Ct
Hejmara çerxên ku bi xala veqetandinê re ji rêza bingehîn heya mezinbûna berbiçav nirxa Ct ye.
Ji bo heman nimûneyê, sondajên pêşîn ên cihêreng di qonaxên amplifikasyonê yên cihêreng de encam didin, û nirxa Ct ya têkildar dê ji hêla karîgerî û asta destwerdanê ve were bandor kirin.Di teoriyê de, nirxa Ct ya sondaya pêşîn a ku em hilbijêrin piçûktir dibe, çêtir e.
Amplification Efficiency
Yek ji rêgezên herî pêbawer û bi îstîqrar ji bo nirxandina karbidestiya zêdekirina PCR-ya standard e, ku ji hêla lêkolîneran ve jî bi berfirehî tête nas kirin.Rêbaz çêkirina rêzek nimûneyan pêk tîne da ku hejmara têkildar a şablonên armanc kontrol bike.Van nimûneyan bi gelemperî ji hêla hûrgelên serial ên çareseriyên stokê yên konsantrekirî ve têne çêkirin, ya ku herî gelemperî tê bikar anîn dirûvekirina 10-qatî ye.Bi karanîna rêzek nimûneyên hûrkirî, karanîna bernameya qPCR ya standard ji bo zêdekirinê ji bo bidestxistina nirxa Cq, û di dawiyê de li gorî berhevoka her nimûneyê û nirxa têkildar a Cq xêzek standard xêz dike da ku hevkêşeya xêzikî Cq= -klgX0+b, û karbidestiya zêdekirinê E=10(-1 /k)-1 bi dest bixe.Dema ku qPCR ji bo analîza jimareyî tê bikar anîn, pêdivî ye ku karbidestiya zêdekirinê di navbera 90% -110% de be (3.6>k>3.1).
Tespîtkirina Nimûneyên Kêm-Kêm
Dema ku berhevoka nimûne kêm be, rêjeyên tespîtkirina sondajên pêşîn ên cihêreng cûda ne.Em 20 nimûneyên kêm-konsantreyî hildibijêrin da ku dubare bikin, û pergala primer-lêkolînê ya ku rêjeya tespîta herî bilind e çêtirîn e.
Rêjeya Guhertinê (CV)
10 nimûneyên dubarekirî dikarin bi sondajên primer ên cihêreng li gorî standarda rêza reagentê ji bo tespîtkirina zêdekirina acîdeya nukleîk werin tespît kirin.
Reagentên mîqdar:
Tamî
Pêdivî ye ku rastbûna di nav yek komê de bigihîje hev: Rêjeya guherînê (CV,%) ya nirxa logarîtmîkî ya berhevoka ceribandinê ≤5%.Dema ku berhevoka nimûneyê kêm be, rêjeya guherbarê (CV,%) ya logarîtma berhevdana tespîtê ≤10% e.
Reagentên kalîteyî:
Tamî
Rastiya di nav yek komê de divê bigihîje:
(1) Rêjeya guherîna nirxa Ct (CV,%) ≤5%
Heman nimûne 10 caran bi paralelî tê ceribandin, û encamên testê divê hevgirtî bin
Dema şandinê: Sep-18-2021
