Ez bawer dikim ku dema ku reaksiyonên PCR-ê dikin her kes dê her gav bi pirsgirêkên weha an weha re rû bi rû bimîne, lê piraniya wan dikarin di du pirsgirêkên sereke de bêne dabeş kirin:

Zêdekirina pir hindik a şablonê genê (zêdekirin);
Pir zêdekirina genê ne-armanc.
Bikaranîna additives yek ji stratejiyên hevpar e ji bo çareserkirina van pirsgirêkan.Bi gelemperî rola lêzêdekan du alî hene:
avahiya duyemînji genan (saziya duyemîn);
Pîvana ne-taybet kêm bikin.
Îro, edîtor dê bi kurtasî pêvekên hevpar ên di reaksiyonên PCR û fonksiyonên wan de bi we bide nasîn.
Additives ku avahiya duyemîn kêm dike
sulfoxide(DMSO)
nimûneyên genêbi naveroka GC ya bilind.Lêbelê, DMSO jî çalakiya Taq polymerase pir kêm dike.Ji ber vê yekê, her kes pêdivî ye ku gihîştina şablonê û çalakiya polîmerazê hevseng bike.Edîtor pêşniyar dike ku hûn dikarin hûrgelên cûda yên DSMO biceribînin, wek mînak ji 2% heya 10%, da ku berhevoka ku li gorî ceribandina we ye bibînin.
Deterjanên ne-îyonîk
Paqijkerên ne-îyonîk, wekî 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 an NP-40, bi gelemperî avahiya duyemîn a DNA kêm dikin.Her çend ev dikare zêdekirina gena şablonê zêde bike, ew ê di heman demê de bibe sedema tengasiya zêdekirina ne-taybetî.Ji ber vê yekê, ev lêzêde ji bo reaksiyonên PCR-a kêm-hilberî bêyî bermayiyê baş dixebitin, lê ji bo reaksiyonên PRC-ya bi nisbet nepak ew qas baş ne.Feydeyek din a paqijkerên ne-îyonîk kêmkirina gemariya SDS ye.Bi gelemperî di dema pêvajoya derxistina DNA de, SDS dê were qonaxa PCR, ku pir çalakiya polîmerazê asteng dike.Ji ber vê yekê, zêdekirina 0,5% Tween-20 an Tween-40 li reaksiyonê dikare bandorên neyînî yên SDS bêbandor bike.
Betaine_
Betaine dikare bi kêmkirina damezrandina strukturên duyemîn ve zêdekirina DNA çêtir bike û bi gelemperî ji kîtên PCR-ê yên bazirganî re pêvekek "nepenî" ye.Heke hûn dixwazin betaine bikar bînin, divê hûn betaine an betaine mono-hydrate (Betaine an Betaine mono-hydrate), lê ne betaine hîdrochloride (Betaine HCl) bixin, bi giraniya paşîn a 1-1.7M verast bikin.Betaine di heman demê de dikare bibe alîkar ku taybetmendiyê baştir bike ji ber ku ew girêdayîbûna pêkhateya cotê bingehîn a helîna DNA / denaturasyona DNA ji holê radike.
Additives ji bo kêmkirina priming ne-taybetî
Formamide
Formamide pêvekek organîk a PCR ya ku bi gelemperî tê bikar anîn e.Ew dikare di ADN-ê de bi xêzika mezin û xêzika piçûk re tevbigere, bi vî rengî aramiya helika dualî ya ADN-ya sereke kêm bike û germahiya helîna ADN-ê kêm bike.Giraniya formamide ya ku di ceribandinên PCR de têne bikar anîn bi gelemperî 1% -5% e.
Tetramethylamonyum klorîd( TMAC)
Tetramethylammonium kloride dikare taybetmendiya hîbrîdîzasyonê (taybetmendiya hîbrîdîzasyonê) zêde bike û germahiya helandina DNA zêde bike.Ji ber vê yekê, TMAC dikare pêşîlêgirtina ne-taybetî rake û girêdana xelet a DNA û RNA kêm bike.Heke hûn bikar bîninprimerên dejeneredi reaksiyona PCR de, ji bîr mekin ku TMAC-ê zêde bikin, ku bi gelemperî di giraniya 15-100mM de tê bikar anîn.
Additives Common Din
Ji bilî du kategoriyên pêvekên ku li jor hatine behs kirin, di reaksiyonên PCR de gelek pêvekên hevpar hene, her çend wan fonksiyonên cûda hebin jî, ew di heman demê de pir girîng in.
Magnesium ion
Iyona magnezyûmê kofaktorek (kofaktor) ya polîmerazê ya domdar e, ango bêyî îyona magnesiumê polîmeraz neçalak e.Lêbelê, pir îyonên magnezyûmê jî dikare bandorê li ser kargêriya polîmerazê bike.Di her reaksiyonên PCR de hûrbûna îyonên magnesiumê dê cûda bibe.Ajanên kelasyonê (wekî EDTA an citrate), giraniya dNTP û proteînan hemî bandorê li giraniya îyonên magnesium dikin.Ji ber vê yekê, heke hûn bi ceribandina xweya PCR-ê re pirsgirêkên we hebin, hûn dikarin hewl bidin ku hûrgelên cûda yên îyona magnesium biguhezînin, mînakî, ji 1.0 ber 4.0mM, bi navberek 0.5-1mM di navberê de.
Hêjayî gotinê ye ku gelek çerxên cemidî-germkirinê dikare bibe sedema stratejiya giraniya çareseriya klorîdê magnesium.Ji ber vê yekê, divê hûn berî her karanîna wê bi tevahî hilweşînin, û berî ku bikar bînin baş tevlihev bikin.
Albumîna seruma bovine(Albumin Bovine, BSA)
Di ceribandinên kîmyayê yên molekulî de, albûmîna serumê ya bovine lêzêdekerek pir gelemperî ye, nemaze di ceribandinên digestiya enzîma sînordar û PCR de.Di reaksiyonên PCR de, BSA di kêmkirina gemarên wekî pêkhateyên fenolî de alîkar e.Û her weha tê gotin ku ew dikare girêdana reaktantan li dîwarê lûleya ceribandinê kêm bike.Di reaksiyona PCR de, bi gelemperî giraniya BSA ya lê zêdekirî dikare bigihîje 0.8 mg / ml.
 
Berhemên Têkildar:
PCR Hero(bi boyaxkirin)
PCR Hero