PCR rasterast reaksiyonek e ku rasterast tevnên heywanan an nebatan ji bo zêdekirina bêyî derxistina asîda nukleîk bikar tîne.Bi gelek awayan, PCR rasterast mîna PCR-ya birêkûpêk dixebite

Cûdahiya sereke tampona xwerû ya ku di PCR-ya rasterast de tê bikar anîn e, nimûne dikare rasterast bi reaksiyona PCR-ê bê derxistina asîda nukleîk were veguheztin, lê ji bo tolerasyona enzîman û lihevhatina tamponê ku di reaksiyona rasterast a PCR-ê de têkildar e hewcedariyên têkildar hene.

Her çend di nimûneyên hevpar de kêm-zêde înhîbîtorên PCR-ê hene, PCR-ya rasterast hîn jî di bin çalakiya enzîm û tamponan de dikare zêdekirina pêbawer bi dest bixe.Reaksiyona PCR ya kevneşopî wekî şablonek asîda nukleîk-kalîteya bilind hewce dike, ku dikare pêşkeftina reaksiyona PCR-ê asteng bike heke şablon proteîn û nepakiyên din hebin.Direct PCR niha yek ji teknolojiyên herî populer ên di warê tespîtkirina molekular de ye.

01 Direct PCR di destpêkê de ji bo heywan û nebatan hate bikar anîn

Serîlêdana zûtirîn a PCR-ya rasterast di warê heywan û nebatan de ye, wek xwîn, tevn û porê mişk, pisîk, mirîşk, kêvroşk, pez, dewar, hwd., pel û tovên nebatan, hwd., ku ji bo lêkolîna genotyping, transgenîk, tespîtkirina plasmîdê, analîza nasîna genê, analîzkirina çavkaniya DNA û nasîna zeviyên din, celebên din têne bikar anîn.

Van zeviyan hin taybetmendiyên hevpar hene, ango naveroka genê armanc bi nisbet zêde ye û derxistina asîda nukleîk tengahî ye, ji ber vê yekê PCR-ya rasterast ne tenê dikare wext xilas bike û bandorek piçûk li ser encaman bike, lê di heman demê de lêçûn jî xilas bike.

PCR-ya rasterast a ku ji bo tespîtkirina pathogen tê bikar anîn mijarek van salên dawî ye, hin çêkerên reagentên PCR dema ku nûbûnê çêbikin di vî alî de gelek hewil dane.Bi taybetî di vê serhildana COVID-19 de, gelek hilberên tespîtkirinê yên weha li sûkê derketine, wek SARS-CoV-2 Kîta Tespîtkirina Asîda Nukleîk (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) ku ji hêla Foregene ve hatî lêkolîn û pêşve xistin, ku teknolojiya RT-PCR-ya rast-dem (rRT-PCR) ji bo tespîtkirina kalîteyî ya SARS-CoV-Nûkleîkî an jî di nav asîdên kalîteyî de SARS-CoV-2 bikar tîne. nimûneyên swab al.

Foregene yek ji wan pargîdaniyên ku teknolojiya Direct PCR bikar tîne, ji bo tespîtkirina ORF1ab, N, E, û normal e.variant xêzên asîdên nukleîk ên di nimûneyên şûba nasopharyngeal an oropharyngeal ên mirovî de wek rêzika SARS-CoV-2 B.1.1.7 (UK), rêza B.1.351 (ZA), rêza B.1.617 (IND) û rêza P.1 (BR).

02  Reagents ji bo PCR rasterast hewce ne

Sample Lysate

Nimûneya lîzatê dikare ji hêla xwe ve were mîheng kirin an bikirin.Cûdahiya di pêkhatina marqeyên cihêreng ên lîzatê de dê şiyana lîzkirinê cûda bike, û dûv re dema lîzkirinê dê hinekî cûda be.Mînakî, ji bo amadekirina nimûneyên tevna heywanan, bi gelemperî lîza 30 hûrdemî an şevek tê pêşniyar kirin, û çareseriya lîzê ji bo vîrusan di navbera 3-10 hûrdeman de ye.

PCR master mix

Tête pêşniyar kirin ku meriv polymeraza DNA-ya-destpêka germ bikar bîne da ku amplifikasyona taybetî zêde bike û şiyana mezinbûnê zêde bike.Bingeha PCR ya rasterast polîmerazek pir tolerant e.

Di nimûneyê de pêkhateyên ku bandorê li zêdekirina ADNyê dikin ji holê rakin an asteng bikin

Piştî ku nimûne bi lîzatê ve were hilberandin, dê proteîn, lîpîd û bermayiyên din ên şaneyê werin berdan, ev madde dê reaksiyona PCR asteng bikin.Ji ber vê yekê, PCR-ya rasterast hewce dike ku ji bo kêmkirina bandora van faktoran rakirina an înhîbîtorên têkildar hewce bike.

03  Komek ji pênc xalên zanînê yên rasterast PCR

Pêşîn, teknolojiya PCR-ya rasterast teknolojiyek rasterast a PCR-ê ye ji bo nimûneyên cûda yên biyolojîkî.Di bin vê şerta teknîkî de, ne hewce ye ku asîda nukleîk ji hev veqetînin û derxin, rasterast nimûneya tevnê wekî objekt bikar bînin, û primerên gena armanc lê zêde bikin ku reaksiyona PCR-ê pêk bînin.

Ya duyemîn, teknolojiya PCR-ya rasterast ne tenê teknolojiyek mezinkirina şablonê DNA-ya kevneşopî ye, lê di heman demê de PCR-ya veguheztina berevajî ya şablonê RNA jî vedihewîne.

Ya sêyemîn, teknolojiya PCR-ya rasterast ne tenê rasterast reaksiyonên PCR-ya kalîteyî ya rûtîn li ser nimûneyên tevnvîsê pêk tîne, lê di heman demê de reaksiyonên qPCR-ya Real-Time jî vedihewîne, ku pêdivî ye ku pergala reaksiyonê xwedan kapasîteya destwerdana floransê ya dijî-paş-paş-ê be û fluoresansa endojen şiyana antagonîst qut dike.

Çaremîn, nimûneyên ku ji hêla teknolojiya Direct PCR ve têne armanc kirin tenê hewceyê berdana şablonên asîda nukleîk in, û proteîn, polysaccharîd, îyonên xwê û hwd yên ku di reaksiyona PCR de asteng dikin dernaxin.Ya ku hewce dike ku di pergala reaksiyonê de polîmeraza asîda nukleîk û PCR Mix hebe ku xwedan berxwedan û adaptasyona hêja be da ku çalakiya enzîmê û rastbûna dubarekirinê di bin şert û mercên tevlihev de misoger bike.

Pêncemîn, nimûneya tevnê ku ji hêla teknolojiya Direct PCR ve hatî armanc kirin bêyî dermankirina dewlemendkirina asîda nukleîk û mîqdara şablonê pir piçûk e, ku pêdivî ye ku pergala reaksiyonê xwedan hesasiyet û karbidestiya zêdekirina pir zêde be.