Birêvebirin

ARN-ya nekodker a dirêj, lncRNA ARN-ya nekodker e ku dirêjahiya wê ji 200 nukleotîdan mezintir e, bi gelemperî di navbera 200-100000 nt de ye.lncRNA îfadeya genê di astên epigenetîk, transkrîpsîyon û piştî-transkrîpsiyonê de birêkûpêk dike, û beşdarî bêdengkirina kromozoma X, çapkirina genom û guherandina kromatînê, aktîvkirina transkripsiyonê, destwerdana transkripsiyonê, veguheztina navokî, rêziknameya çerxa hucreyê, cihêrengiya şaneyê, û pir bandorên tezmînata dozê bi rêkûpêkkirina şaneyê re têkildar in. û pêşîlêgirtina nexweşiyên mirovî, û niha yek ji xalên germ in di warê bijîjkî de.

01  Cure û taybetmendiyên LncRNA

lncRNA li gorî çavkaniyên cihêreng ên çêbûna wê, wekî ku di jimareya li jor de tê xuyang kirin, li gelek celeban tê dabeş kirin.Taybetmendiyên jêrîn hene:

1. lncARN bi gelemperî dirêjtir in, bi vegotina dînamîk û bi awayên cuda yên hevberdanê di dema cihêbûnê de
2. Li gorî genên kodker, lncRNA bi gelemperî xwedan asta vegotinê kêmtir e
3. Piraniya lncRNA di pêvajoya cûdabûn û pêşkeftina tevnvîsê de xwedan taybetmendiya îfadeya demkî û mekan a eşkere ne.
4. Di tûmor û nexweşiyên din de îfadeyên karakterîstîk hene
5. Cihên binxaneyî yên lncARNyê cihêreng in
6. Rêz di parastinê de kêm e, lê fonksiyon xwedan astek parastinê ye, hwd.

02 Pirsên Pir Pir Di derbarê Veguheztina Berevajî ya LncRNA de

Ji ber naveroka kêm a lncRNA di hucreyan de, dirêjahiya dirêj û avahiyek astek bilind, RNA-ya weha bi gelemperî xwedan strukturên tevlihev ên mîna lûpên stûnê an çîpên porê ye, û RT-qPCR ji pirsgirêkên veguheztina berevajî ya neserkeftî an jî karbidestiya kêm re meyil e.

03 Çareseriya veguheztina berevajî ya LncRNA

Di qaîdeya navendî de, pêvajoya vîrusên RNA ku transkrîptaza xwe ya berevajî bikar tînin ji bo sentezkirina ADN-ê ku RNA-yê wekî şablonek bikar tînin, jê re transkrîpsiyona berevajî tê gotin.Pêvajoya karanîna transkriptaza berevajî ya RNA virusê ji bo sentezkirina şablonê cDNA di vitro de jê re transkrîpsiyona berevajî tê gotin.Hêmanên sereke yên ku di pergala veguheztina berevajî de hene: şablonê RNA, transkrîptaza berevajî, primers û pêkhateyên din.

Şablon 1.RNA

Bandora şablonê RNA li ser veguheztina berevajî di avahî, paqijî û yekbûna wê de xuya dike.Paqijî û yekitiya RNA-ya hatî derxistin çi qas bilindtir be, ew qas karbidestiya veguheztina berevajî bilindtir dibe û encamên hêjmarî yên paşîn rastirtir dibe.RNA ya ku ji hêla reagentên derxistina RNA yên ku bi gelemperî têne bikar anîn têne paqij kirin bi gelemperî bermahiyên alkol û xwêyên guanidine vedihewîne, ku li ser piraniya transkriptaza berevajî bandorek mêtîngerek xurt heye.

2.Transkriptaza berevajî

Transkriptaza berevajî di tevahiya pergala veguheztina berevajî de xwedî bandorek sereke ye.Germahiya guncaw ji bo transkriptaza berevajî ya ku di pir laboratuaran de tê bikar anîn bi gelemperî 42 °C ye.Bi rastî, vekirina avahiya RNA-a-asta bilind germahiyek bilindtir hewce dike, û hewcedariyên ji bo transkrîptaza berevajî bilindtir in.

3.Primer

Destpêkên veguheztina berevajî primerên gene-taybetî, primerên rasthatî û primerên Oligo dT hene.Piranîya lncRNA dûvikên polyA-yê nagirin, û girîng e ku bi rêkûpêk pêşbirkên bêserûber bi Oligo dT re were hevber kirin.

4.Pêkhateyên din

Ji ber vê yekê ku RNA bi taybetî bi hêsanî hilweşandî ye, danasîna pêkhateyan di pergala veguheztina berevajî de dikare were kêm kirin, ku dikare bi bandor pêşî li têketina RNase bigire û pêşkeftina birêkûpêk a veguheztina berevajî misoger bike.

Foregeneji şablonê ARN-ê werdigire, berevajî veguherîna qPCR

Bi berfirehî vedîtina lncRNA xwe bişopînin

Tevahiya RNA ya heywanan IsolationKit (bi stûna rakirina gDNA)

Tevahiya RNA ya xaneyê IsolationKit (bi stûna rakirina gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (Bi gDNase) (Super Premix ji bo senteza cDNA-ya yekem ji lncRNA)

Wextê rast PCR EasyTM-SYBR Kesk I

Aavantajên ofDerxistina RNA:

Kit teknolojiya derxistina RNA-yê nifşê sêyemîn bikar tîne, ne hewce ye ku DNase bikar bîne.

11 hûrdeman ji hucreyên çandî yên 96, 24, 12, û 6-kalîte, derxistina bi karbidestiya bilind a RNA-ya hucreya tevahî ya bê gDNA, paqijiya bilind û kalîteya bilind.

Avantajên veguheztina berevajî ya lncRNA:

Pergalek veguheztina berevajî ya ku bi taybetî ji bo LncRNA hatî pêşve xistin da ku zû gemariya DNA-ya genomîk rake.

Pergala veguheztina berevajî xwedan aramiya germî ya bilind e û hîn jî di 50 °C de performansa veguheztina berevajî ya baş heye.

Şablonên bi naveroka GC-ya bilind û strukturên navîn ên tevlihev dikarin bi karbidestiya bilind berevajî bibin.

Avantajênof qPCR:

Destpêka germ Foregene Taq Polymerase xwedan karbidestiya amplifikasyonê, hestiyariya zêdekirina zêde, û taybetmendiya bihêzkirina bilind e.

Real PCR Easy Mix ya xweşbînkirî dihêle ku SYBR Green I xwedan hestiyariya vedîtina bilindtir be, û şiyana wê ya fluorescence 3-5 carî ji hilberên wekhev e, ku dikare hewcedariyên cûrbecûr ceribandinên mîqdar ên floransê bicîh bîne.