Gelek îcadên şoreşger ên di dîroka teknolojiya tespîtê de di hişê min de teknolojiya immunolabeling-ê ye ku li ser bingeha prensîba girêdana taybetî ya antîjen-antîpot, teknolojiya PCR û teknolojiya rêzgirtinê ye.Îro em ê li ser teknolojiya PCR biaxivin.Li gorî pêşkeftina teknolojiya PCR, mirov bi gelemperî teknolojiya PCR-ê li sê nifşan dabeş dikin: teknolojiya PCR-ya asayî, teknolojiya PCR-ya mîqdar a fluorescent ya rast û teknolojiya PCR-ya dîjîtal.
Cteknîka ommon PCR
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis di sala 1983-an de reaksiyona zincîra polîmerazê (reaksiyona zincîreya polîmerazê, PCR) îcad kir. Tê gotin ku dema ku wî hevala xwe ajotibû, ji nişka ve îlhamek jê re derket û li prensîba PCR (li ser feydeyên ajotinê) fikirî.Kary Mullis di sala 1993 de Xelata Nobelê ya Kîmyayê wergirt. New York Times şîrove kir: "Pir orjînal û girîng e, hema hema biyolojiyê di serdemên pêş-PCR û piştî PCR de dabeş dike.
Prensîba PCR: Di bin katalîzasyona ADN-yê polymerase de, DNA-ya zincîra dayikê wekî şablon tê bikar anîn, û primera taybetî wekî xala destpêkê ya dirêjkirinê tê bikar anîn, û ADN-ya keça ku temamkerê ADN-ya şablonê zikmakî ye, di vitro de bi denaturasyon, helandin, dirêjkirin û gavên din tê kopî kirin.Ew teknolojiyek zêdekirina senteza DNA di vitro de ye, ku dikare bi lez û bez her DNA-ya armancê di vitro de zêde bike.
Avantajên PCR-ya normal
1.Rêbaza klasîk, standardên navneteweyî û navxweyî temam dike
2.Mesrefa kêmtir a reagentên amûran
3.Berhemên PCR dikarin ji bo ceribandinên din ên biyolojiya molekulî werin vegerandin
Pêşniyarkirina makîneya Foregene PCR: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Berhemên têkildar: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Dezawantajên PCR-ya normal
1.bi hêsanî qirêj kirin
2.operasyona dijwar
3.tenê analîzên kalîteyî
4.hesasiyeta nerm
5.Zêdebûnek ne-taybetî heye, û gava ku band netaybet bi qasî bandê armanc be, ew nayê cûda kirin.
CPCR-ya-based elektroforez apilar
Di bersivê de kêmasiyên PCR-ya asayî, hin hilberîner li ser bingeha prensîba elektroforeziya kapîlar amûran destnîşan kirine.Pêngava elektroforezê piştî zêdekirina PCR di kapilarê de qediya.Hesasiyet bilindtir e, û ferqa çend bingehan dikare were veqetandin û zêdebûn ji hêla MAERKER ve were hesibandin.naveroka berhemê.Kêmasî ev e ku hilbera PCR hîn jî pêdivî ye ku were vekirin û têxin nav amûrê, û hîn jî xetereyek mezin a qirêjbûnê heye.
CapillaryElectrophoresis
2. Teknolojiya PCR-ya mîqdar a fluorescent ya rastîn (Quantitative Real-time PCR, qPCR)PCR-ya mîqdar a fluorescent, ku jê re Real-Time PCR jî tê gotin, teknolojiyek nû ya mîqdar a asîda nukleîk e ku ji hêla PE (Perkin Elmer) ve di sala 1995-an de hatî pêşve xistin. Dîroka pêşkeftina PCR-ya mîqdar a fluorescent, dîroka têkoşînên giyanî yên gewher ên wekî ABI, Roche, û Bio-Rad e.Heke hûn eleqedar in, hûn dikarin wê kontrol bikin.Ev teknîk niha teknîka PCR ya nîv-hejmarî ya herî gihîştî û berfireh e.
Makîneya qPCR Pêşniyar kirin:https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Rêbaza boyaxa fluorescent (SYBR Kesk I):SYBR Green I ji bo PCR-ya mîqdar a ku herî zêde tê bikar anîn boyaxa girêdana DNA-yê ye, ku ne-taybetî bi ADN-ya dubendî ve girêdide.Di rewşa azad de, SYBR Green fluoresansek qels derdixe, lê gava ku bi DNA-ya dubendî ve were girêdan, fluoresansa wê 1000 qat zêde dibe.Ji ber vê yekê, tevahiya sînyala fluorescentê ya ku ji hêla reaksiyonê ve hatî derxistin bi mîqdara ADN-ya dubendî ya heyî re têkildar e û dê bi zêdebûna hilbera zêdekirî re zêde bibe.Ji ber ku boyax bi ne-taybetî bi ADN-ya dubendî ve girêdide, dibe ku encamên erênî yên derewîn çêbibin.
Berhemên têkildar: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Rêbaza sondaya fluorescent (teknolojiya Taqman): Di demaZêdekirina PCR, di heman demê de bi cotek primers re sondayek fluorescentê ya taybetî tê zêdekirin.Lêpirsîn oligonukleotîdek xêzik e, ku bi rêzê ve komek nûçegihanê fluorescent û komek quencher a fluorescentî li her du dawiyan têne nîşankirin.Dema ku sonda saxlem be, sînyala fluorescentê ya ku ji hêla koma nûçegihanan ve hatî weşandin ji hêla koma quencher ve tê vegirtin, û vedîtina îşaretek fluorescentê tune;di dema zêdekirina PCR de (di qonaxa dirêjkirinê de), çalakiya 5'-3' Dicer a enzîma Taq dê sondajê dişewitîne û xera dike, ji ber vê yekê koma fluorescentê ya nûçegihan û koma fluorescentê quencher ji hev têne veqetandin, da ku pergala şopandina floransê were wergirtin. hevdemkirina berhevkirina sînyalên fluorescent û avakirina hilberên PCR.Rêbaza lêpirsîna Taqman di tespîtkirina klînîkî de rêbaza tespîtkirinê ya herî gelemperî ye.
Berhemên têkildar: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Avantajên qPCR
1.Rêbaz gihîştî ye û amûr û reagentên piştgirî temam in
2.Mesrefa navîn ya reagents
3.bikaranîna wê hêsan e
4.Hesas û taybetmendiya tespîtkirina bilind
Dezawantajên qPCR
Mutasyona genê hedef rê li ber tesbîtkirina winda dibe.
Encama tespîtkirina şablonê kêm-konsantrasyon nikare were destnîşankirin.
Dema ku ji bo vedîtina jimareyî kêşeya standard bikar tîne xeletiyek mezin heye.
3. Teknolojiya PCR dîjîtal (PCR dîjîtal, dPCR).
PCR dîjîtal teknîkek ji bo pîvandina bêkêmasî ya molekulên asîda nukleîk e.Li gorî qPCR, PCR-ya dîjîtal dikare rasterast hejmara molekulên DNA/RNA bixwîne, ku ev yek pîvana bêkêmasî ya molekulên asîda nukleîk di nimûneya destpêkê de ye.Di sala 1999 de, Bert Vogelstein û Kenneth W. Kin-zler bi awayekî fermî têgeha dPCR pêşniyar kirin.
Di 2006-an de, Fluidigm yekem bû ku amûrek dPCR-a-çîp a bazirganî hilberand.Di 2009 de, Life Technologies pergalên OpenArray û QuantStudio 12K Flex dPCR dan destpêkirin.Di sala 2013-an de, Life Technologies pergala QuantStudio 3DdPCR da destpêkirin, ku teknolojiya çîpê mîkrofluîdî ya nanopîvana bilind-dans bikar tîne da ku nimûneyan li 20,000 hucreyên kesane bi rengek wekhev belav bike.di reaksiyonê de baş.
Di sala 2011-an de, Bio-Rad amûrê QX100 dPCR-a-bingeha dilopê dest pê kir, ku teknolojiya av-di-rûnê bikar tîne da ku nimûneyê li 20,000 dilop-avê-di-rûn-rûn belav bike, û analîzerek dilopê bikar tîne da ku dilopan analîz bike.Di sala 2012-an de, RainDance amûra RainDrop dPCR, ku ji hêla gaza tansiyona bilind ve tê ajotin, da destpêkirin, da ku her pergala reaksiyonê ya standard li emulsiyonek reaksiyonê ya ku ji 1 mîlyon heya 10 mîlyon pikolîter-asta mîkro-dilopan vedihewîne, dabeş bike.
Heya nuha, PCR-ya dîjîtal du beşên sereke ava kiriye, celebê çîpê û celebê dilopê.Çi cureyê PCR-ya dîjîtal çi be jî, prensîbên wê yên bingehîn kêmkirina kêmkirina, xala dawîn PCR û belavkirina Poisson sînordar in.Pergala reaksiyonê ya PCR ya standard ku şablonên asîda nukleîk vedihewîne, bi deh hezaran reaksiyonên PCR-ê, ku li ser çîp an mîkrodilopan têne belav kirin, bi heman rengî tê dabeş kirin, da ku her reaksiyon bi qasî ku pêkan molekulek şablonê dihewîne, û reaksiyonek PCR-a şablonê yek-molekûl tê kirin.Bi xwendina floransê Hebûn an tunebûna sînyalê tê jimartin, û mîqdara mutleq piştî kalibrasyona belavkirina Poisson a îstatîstîkî tê kirin.
Li jêr taybetmendiyên çend platformên PCR-ya dîjîtal ên ku min bikar anîne hene:
1. Bio-Rad QX200 dilopek PCR dîjîtal Bio-RadQX200 platformek PCR-ya dîjîtal a pir klasîk e, pêvajoya tespîtkirina bingehîn: 20,000 nimûne ji hêla jeneratorê dilopê ve têne hilberandin Mîkro-dilopên av-di rûn de li ser makîneyek PCR-ya asayî têne zêdekirin, û di dawiyê de sînyala floransê ya her mîkro-dilopek ji hêla xwendevanek mîkro-dilopê ve tê xwendin.Operasyon tevlihevtir e, û xetera qirêjiyê navîn e.
Xinyi TD1 micro-droplet PCR dîjîtalXinyi TD1 platformek PCR ya dîjîtal a navxweyî ye, pêvajoya tespîta bingehîn: 30,000-50,000 dilopên av-di-rûnê bi jeneratorek dilopê çêbike, li ser amûrek PCR-ya hevpar zêde bike, û di dawiyê de derbas bibe Xwendevanê dilopê sînyala fluorescentê ya her dilopê dixwîne.Hem hilberîna dilopê û hem jî xwendina di vê platformê de di çîpek veqetandî de bi xetereya kêmbûna pîsbûnê têne kirin.
STILLA Naica çîpê mîkro-droplet PCR dîjîtalSTILLA Naica platformek PCR-ya dîjîtal a nisbeten nû ye.Pêvajoya tespîtkirina bingehîn ev e: çareseriya reaksiyonê li çîpê zêde bikin, çîpê têxin nav pergala hilberîn û zêdekirina mîkro-dilopê, û 30,000 mîkro-dilopan çêbikin.Li ser çîpê belav dibe, û zêdekirina PCR li ser çîpê qediya.Dûv re çîpa zêdekirî tê veguheztin pergala analîza xwendina mîkro-dilopê, û bi kişandina wêneyan sînyala fluorescentê tê xwendin.Ji ber ku tevahiya pêvajo di çîpek girtî de pêk tê, xetereya gemarê kêm e.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D chip dîjîtal PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D platformek din a klasîk a PCR-ya dîjîtal a li ser çîpê ye.Pêvajoya tespîtkirina wê ya bingehîn ev e: çareseriya reaksiyonê li belavkerê zêde bikin, û çareseriya reaksiyonê li ser çîpê bi 20,000 mîkrokan bi navberê belavker ve belav bikin., çîpê deyne ser makîneya PCR da ku zêde bibe, û di dawiyê de çîpê têxe nav xwendevan û wêneyek bikişîne da ku sînyala fluorescentê bixwîne.Operasyon bi nisbeten tevlihev e, û tevahiya pêvajo di çîpek girtî de tê meşandin, û metirsiya vegirtinê kêm e.
5. JN MEDSYS Clarity chip dîjîtal PCR
JN MEDSYS Clarity platformek PCR-ya dîjîtal a bi tîpa çîpê nisbeten nû ye.Pêvajoya tespîtkirina wê ya bingehîn ev e: çareseriya reaksiyonê têxin nav sepanê, û çareseriya reaksiyonê bi yekcarî li ser 10,000 lûleyên PCR yên ku di lûleya PCR-ê de bi navgîniya sepanê ve hatine saxkirin belav bikin.Li ser çîpa mîkroporous, çareseriya reaksiyonê bi çalakiya kapîlar dikeve nav çîpê, û lûleya PCR ya bi çîpê re ji bo zêdekirinê li ser makîneya PCR tê danîn, û di dawiyê de çîp tê danîn nav xwendevanê da ku bi kişandina wêneyek sînyala fluorescentê bixwîne.Operasyon bêtir tevlihev e.Rîska enfeksiyonê kêm e.
Parametreyên her platforma PCR ya dîjîtal bi vî rengî têne kurt kirin:
Nîşaneyên nirxandinê yên platforma PCR-ya dîjîtal ev in: Hejmara yekîneyên dabeşkirî, hejmara kanalên fluorescent, tevliheviya xebitandinê û xetereya gemariyê.Lê ya herî girîng rastbûna tespîtê ye.Rêyek ji bo nirxandina platformên PCR-ya dîjîtal ev e ku meriv gelek platformên PCR-ya dîjîtal bikar bîne da ku hevûdu verast bikin, û rêyek din jî karanîna madeyên standard bi nirxên rast e.
Avantajên dPCR
1.Gihîştina hejmartina mutleq
2.Hesas û taybetmendiya bilind
3.Dikare nimûneyên kopiyên kêm tespît bike
Dezawantajên dPCR1. Amûr û reagentên biha 2. Operasyona tevlihev û dema tespîtkirina dirêj 3. Rêjeya tespîtkirina teng
Heya nuha, sê nifşên teknolojiya PCR xwedî awantaj û dezawantajên xwe ne, û her yek xwedan qadên serîlêdanê yên xwe ne, û ne têkiliyek e ku nifşek şûna yê din bigire.Pêşveçûna domdar a teknolojiyê zindîbûnek nû xistiye nav teknolojiya PCR, û dihêle ku ew yek rêgezek serîlêdanê li dû yekî veke, ku tespîtkirina asîda nukleîk hêsantir û rasttir dike.
Çavkanî: Dr. Yuan we ji bo ceribandinê digire
Berhemên Pêşniyar:
Dema şandinê: Nov-18-2022
