Li ser derxistina RNA

Sî sal berê, ji bo derxistina ARNyê, ya ku me dikaribû bifikire tenê ev bû ku meriv çawa RNA-ya bêkêmasî bi dest dixe, lêbelê, ji bo leza derxistinê hewcedarî tune bû (Tekolojîya nifşa yekem, rêbaza Trizol çêbû).Bi nûvekirina dubare ya teknolojiya derxistina RNA, ya ku em dikarin bikin ne tenê bi bidestxistina encaman re sînordar e.Dema ku bi derxistina reagentên bingehîn ên Trizol-a nifşa yekem re rû bi rû mabûn, ceribandinvan bi gelemperî ji gavên wê yên xebata dijwar aciz bûn;her çend piştî gelek optimîzasyon û nûjeniyan, dîsa jî gelek dem girt.Di heman demê de, pêdivî ye ku reagentên organîk ên wekî fenol û kloroform di pêvajoya derxistinê de werin bikar anîn, ku ev jî heya radeyekê ewlehiya karmendên têkildar jî tehdîd dike.

Karbidest, hêsan û ewledar

Dîtina hilberek derxistina RNA ya bikêr, hêsan û ewledar bûye armanca bingehîn a ceribandinan.Ji ber vê yekê, ji bo derxistina RNA rêbaza adsorpsiyonê ya Stûna Silica Spin derket holê.Berhemên derxistina RNA-yê nifşê sêyem ên Foregene ji avantajên hilberên derxistina stûna nifşê berê vedigirin, (tenê Paqijkirina DNA + RNA) du teknolojiya Stûna Spin bikar tînin da ku di heman demê de gDNA û bermahiyên tevnvîsê ji holê rakin, bêyî dermankirina DNase ya gDNA ya mayî, û êdî fenol bikar neynin, hwd. hilweşandin.

Tabloya berhevdana pêvajoya operasyonê

Tabloya berhevdana encamên ezmûnî

Kîta veqetandina RNA-ya tevahî ya Foregene xwedan hilberîna derxistina RNA-yê bilind, paqijiya baş e, û bandora derxistina miRNA ji kîtên markayên din çêtir e.

Elektroforeza 50 mg RNA ya tevayî ya kezeba mişkê bi rêbazên cihêreng tê derxistin
Nifşa yekem (1: Trizol)
Nifşa duyemîn (2: kîtê derxistina RNA ji pargîdaniya A)
Nifşa sêyem (3: Kîta derxistina RNA plus ji pargîdaniya A, 4: Foregene: Kîtên îzolekirina RNA)

Grafika qPCR (grafika kêşeya amplification)

Pêdivî ye ku DNAya genomîk di dema derxistina RNA de bi bandor were rakirin, wekî din ew ê bandorên nekontrol li ser ceribandinên jêrîn (nirxa CT-ya zû, erênîyên derewîn) hebe.Kîta nifşê pêşerojê Foregene dikare bêyî lêzêdekirina DNase DNA-ya genomîk bi rengek bêkêmasî rake, gelek dem teserûf dike, di heman demê de ji xirabûna ku ji ber gemariya RNase-ya eksogenous pêk tê dûr dixe.
Nifşa yekem (kesk TRlzol-, sor TRlzol+ nîşan dide)

Nifşa duyemîn (Şîn kîta derxistina RNA ya Pargîdaniya A nîşan dide -, sor kîteyek derxistina RNA ya Pargîdaniyek +)

Nifşa sêyem (şîn nîşana pargîdaniya A kîtek derxistina RNA plus, kesk kîtên îzolekirina RNA Foregene nîşan dide)

(Têbînî: "_" di grafika qPCR de nîşan dide ku DNase nehatiye zêdekirin, û qirêjiya DNA nehatiye rakirin; "+" destnîşan dike ku DNase hatiye zêdekirin, û gemariya DNA ji holê hatiye rakirin)

Di nav 11 hûrdeman de derxistina RNA biqede

Ne hewceyî bi salan berhevkirina ezmûna derxistina asîda nukleîk e, hilberên rêzikên kîteyên veqetandina RNA-ya giştî ya bi karbidestiya bilind a Foregene dikarin bihêlin ku hûn di nav 11 hûrdeman de RNA-ya hilber û paqijiya bilind bistînin da ku hewcedariyên cûrbecûr ceribandinên jêrîn bicîh bînin.

Heya nuha, hilberên rêzikên kîteyên izolaton ên RNA yên Foregene ji hêla hejmareke mezin a xerîdar ve hatine nas kirin û beşdarî gelek wêjeyên bi rêjeyên bilind bûne.Bikaranîna rastîn a xerîdar a nexşeya elektroforezê ya berevajîkirinê û kêşeya zêdekirina PCR-ya jimareyî piştî veguheztina berevajî nîşan dide ku RNA ya ku bi karanîna hilberên Foregene ve hatî derxistin ne tenê di berhevdanê de zêde ye, lê di heman demê de di yekparebûna baş de jî heye.Tenê teknolojiya hilberê ku ji hêla sûkê ve hatî ceribandin dikare ji hêla her kesî ve were xweş kirin.

Kîta îzolekirina RNA ya tevhev

Hilberîna RNA ya bilind

Lezgîn: Di 11 hûrdeman de veqetandina RNA biqedînin

Ewlehî: Ne kîmyewî organîk lê zêde kirin

Çend îspatên bilind:

1. Yuan Fang, Zezhong Liu, Yang Qiu, et al.Astengkirina suppressorê vîrusê ya proteînên RNAi ji hêla peptîdên sêwirker ve ji enfeksiyona enteroviral di vivo de diparêze, Immunity, 54 (10), 2021: 2231-2244.e6.(IF: 31.745,Kîta îzolekirina RNA ya vîrus(Nimreya pisîkê RE-02011)

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1074761321003617

2. Ren, Y., Wang, A., Wu, D. et al.Astengkirina dualî ya berevaniya xwezayî û apoptozê ji hêla proteîna cytomegalovirus a mirovî UL37x1 ve vejandina vîrusê bi bandor çêdike.Nat Microbiol 7, 1041–1053 (2022).(IF: 30.964,Kîta îzolekirina RNA ya tevhev(Nimreya pisîkê RE-03111)

https://doi.org/10.1038/s41564-022-01136-6