Di van demên dawî de, min tiştek ecêb kifş kir!Gelek pisporên ezmûnên pêşkeftî yên li dora wî hin xalên zanîna ceribandinê yên pir bingehîn jî nizanin.

Mînakî, hûn dikarin bersiva pirsên jêrîn bidin?

Di navbera OD260 û A260 de cûdahî heye?Her yek tê çi wateyê?
OD kurteya dendika optîkî ye (dendika optîkî), A kurtebirê (absorbance) ye, her du têgeh bi rastî yek in, "dengiya optîkî" "absorbasyon" e, lê "dûrbûna optîkî" li gorî piraniya standardên neteweyî ye û bêtir standardkirî ye.

Bi gelemperî em nirxa OD-ê li 260nm dipîvin da ku berhevoka asîdê ya nukleîk hesab bikin, ji ber vê yekê 1OD çi temsîl dike?
Asîda nukleîk di dirêjahiya pêla 260nm de lûtkeya herî zêde ya vegirtinê heye, ku hem ADN û RNA, hem jî perçeyên asîda nukleîîk ên perçebûyî dihewîne (ev xala bingehîn e).
Nirxa OD ya ku di dirêjahiya pêlê ya 260 nm de hatî pîvandin wekî OD260 hate tomar kirin.Heke nimûne paqij e, nirxa OD260 dikare pîvana nimûneya asîda nukleîk hesab bike.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (ADN-ya dubendî)
=37 μg/ml ssDNA (ADN-ya yek-bendî)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (oligonukleotîd)
Di navbera RT-PCR, Realtime-PCR û QPCR de girêdan û cûdahiyek heye?
RT-PCR kurteya PCR ya Veguheztina Berevajî ye
Real Time PCR=qPCR, kurteya PCR ya Dema Rast a Hêjdar
Her çend Real Time PCR (PCR-ya fluorescent ya jimareyî ya rast-rast) û PCR-ya Veguheztina Berevajî (PCR veguheztina berevajî) herdu jî wekî RT-PCR têne kurt kirin.Lê peymana navneteweyî ev e: RT-PCR bi taybetî behsa PCR-ya veguheztina berevajî dike.

Ji bo danasîna dirêjahiya ADN/RNA di biyolojiyê de nt, bp, û kb bi gelemperî têne bikar anîn?
nt = nukleotîd
bp = cotê bingehê
kb = kilobase

Bê guman, hûn ê bibêjin ku gelek kes guh nadin van hûrguliyên piçûk!Her kes vê yekê dike, û kes dê ji we nepirse ka ew çi ye.Hûn dizanin ku ev nepêwist e, rast?

Na, Na, Na, zanîna vê yekê pir hewce ye!ji ber ku?
Ji ber ku hûn dixwazin gotarek bişînin!Brak!Ma hûn mezûnbûnê armanc dikin an jî destkeftiyên lêkolîna zanistî dişopînin, divê hûn xwe bispêrin gotarên ku biaxivin!

Divê derxistina asîda nukleîk ceribandina herî hêsan û bingehîn be.Kalîteya derxistina asîda nukleîk rasterast encamên ceribandinên paşîn diyar dike.

Her çend min gelek caran gotibe jî, dîsa jî gelek hevalên ku xema wan nakin hene.Vê carê min biryar da ku ji gotarê derkevim!

Agahdariya Kêmtirîn ji bo Weşandina Ezmûnên PCR-ya Rast-Time ya Hêjdar, ku wekî MIQE tê binav kirin, komek rêwerzên ceribandina mîqdar a floransê ye ku li qada navneteweyî hatî destpêkirin, ku standardên herî kêm ji bo agahdariya ceribandinê ya ku ji bo nirxandina ceribandinên PCR-ya mîqdar ên fluorescence û weşandina gotaran hewce dike pêşniyar dike.Bi şert û mercên ceribandinê û rêbazên analîzê yên ku ji hêla ezmûnker ve têne peyda kirin, vekoler dikarin rastdariya nexşeya ceribandinê ya lêkolîner çêtir binirxînin.

Tê dîtin ku di beşa derxistina asîda nukleîk de, tiştên tespîtkirina jêrîn hatine pêşniyar kirin,

"E" agahdariya ku divê were peyda kirin û "D" agahdariya ku heke hewce be divê were peyda kirin destnîşan dike.

Forma pir tevlihev e, bi rastî, ez dixwazim bibêjim ku her kes hewce dike ku ji dest pê bike

paqijî (D), berberî (D), yekparebûn (E) û hevgirtî (E) ji bo nirxandina asîdên Nukleîk di van çar aliyan de.

Li gorî adetên ceribandinê, pêşî li ser rêbazên nirxandina paqijî û hûrgelê biaxivin.

Pîvana OD ji bo ceribandinvanan rêbaza tespîtkirina bijare û herî hêsan e.Ji bo prensîbê, ez ê li vir neçim hûrguliyan.Gelek laboratuar nuha spektrofotometerên ultra-mîkro bikar tînin da ku rasterast nimûneyên asîda nukleîk bi pîvanan analîz bikin.Dema ku nirxa vegirtinê nîşan dide, bername rasterast nirxa berhevdanê (acîda nukleîk, proteîn û rengê fluorescent) û rêjeyên têkildar dide.Ji bo analîzkirina nirxa OD, vê wêneyê hilînin û hûn ê baş bibin.

Lîsteya çareseriya nirxa OD ya gerdûnî

Lêbelê, çend hişyarî hene ku hewce ne ku ji we re ji hev cuda werin derxistin.

(Piştî her tiştî, ez dizanim ku divê hûn bibin yên ku xilas dikin û li bendê bin heya ku hûn hewceyê wan bin!)

Têbînî 1 Amûr

Nirxa OD-ê dê ji hêla amûrên cihêreng ve were bandor kirin.Heya ku OD260 di nav rêzek diyar de ye, nirxên OD230 û OD280 watedar in.Mînakî, rêza vegirtinê ya Eppendorf D30 ya hevpar li 260nm 0 ~ 3A ye, û NanoDrop One of Thermo li 260nm e.Rêjeya vegirtinê ya 0.5 ~ 62.5A.

Nîşe 2Reagenta Dilution

Nirxa OD dikare ji hêla hûrbûna reagentên cihêreng ve were bandor kirin.Mînakî, xwendina OD260/280 ya RNA ya paqijkirî di pH de7,5 10mM Tristampon di navbera 1.9-2.1 de ye, dema ku diçareseriya avê ya bêalîrêjeya wê kêmtir be, belkî tenê 1,8-2,0 be, lê ev nayê wê wateyê ku kalîteya RNA Cûdahî diguhere.

Nîşe 3Madeyên bermayî

Hebûna maddeyên mayî dê bandorê li rastbûna pîvandina berhevoka asîdên nukleîk bike, ji ber vê yekê pêdivî ye ku heya ku gengaz be ji bermahiyên proteîn, fenol, polysaccharîd û polîfenolê di nimûneyên asîda nukleîîk de dûr bisekinin.

Lêbelê, bi rastî, derxistina bi reagentên organîk rêbazek kevn e.Di kîtên bazirganî de, bandora derxistinê dikare bi stûnek adsorpsiyonê ya bingeh-sîlîka ku bi santrîfûjasyonê ve girêdayî ye were bidestxistin, ji reagentên organîk ên jehrîn û zirardar ên ku rakirina wan dijwar e, û hwd. Pirsgirêk, wekîKiteya derxistina asîda nukleîk a Foregene, di tevahiya operasyonê de DNase/RNase û reagentên organîk ên jehrîn bikar nayîne, zû û ewledar e., û yabandor ebaş(bi tesadufî got ku ew qels bû, lê ez dizanim ku hûn dixwazin zanibin).

Mînak 1: Berhem û paqijiya derxistina DNA ya genomîk

Foregene Soil Insolation Kit (DE-05511) nimûneyên axê ji çavkaniyên cihêreng derman dike, û mîqdar û paqijiya DNA ya genomîk a ku hatî wergirtin di tabloya jêrîn de têne destnîşan kirin:
Mînak 2: Hilberîn û paqijiya ARNya tevnvîsê

Kita Veqetandina RNA ya Tevahiya Heywanan (RE-03012) nimûneyên cûrbecûr tevnê hildiberîne, û mîqdar û paqijiya RNA ya ku hatî bidestxistin di tabloya jêrîn de (ji bo tevna mişk) têne xuyang kirin:
Lêbelê, nefikirin ku hûn bi nirxa OD re qediyane.Ma hûn li ser xalên sereke yên ku min ji we re li pêşiyê xêz kirine lênêrînek heye?

Nivîsk

Dê molekulên asîda nukleîk ên perçebûyî jî di vegirtinê de bêne hesibandin.Bihesibînin ku di ARNyê de bermayiyên DNA yên genomîk hene, dê nirxa weya OD pir zêde xuya bike, lê giraniya rastîn a RNA nikare were destnîşankirin.Ma RNAya we ne diyar e ka hilweşandin heye, ji ber vê yekê em hîn jî hewceyê rêbazek nirxandinê ya berfireh e ku dadbarek rasttir bidin, ango nirxandina yekbûna asîdên nukleîk ku di MIQE de hatî destnîşan kirin.