Serişteyên ji bo Pêşvebirina Glue Recovery

1. Di dema elektroforezê de barkirina nimûneyê zêde bikin.

2. Tampona elektroforezê ya nû amadekirî bikar bînin.

3. Dema birîna benîştê, biceribînin ku tenê benîştê bi şirîtan bibirrin da ku qebareya birrîna benîştê kêm bikin: bi çend perçeyên mebestê ne hewceyî benîştê ne, wekî din ew ê bandorê li rêjeya başbûnê bike.

4. Piştî helandina du an jî zêdetir perçeyên benîştê, lûleyekê bi kar bînin bê hejmûn çiqas mezin be û wê veguhezînin heman stûnê.

5. Çareseriya ku di solê de hatî zêdekirin dikare piçekî zêdetir be, ku ji bo girêdana ADN-ê bi membranê re guncantir e, lê bi gelemperî 750 ul derbas nabe.

6. Mifteya vegerandina gêlê ew e ku ADNyê bi stûnê ve girêbide bi riya tansiyona xwê, asîtî (bar) û hîdrofobîtbûna çareya di stûnê de.Ji ber vê yekê, heke pHya tampona elektroforezê pir zêde be, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) dikare li sol were zêdekirin;ji bo ku molekulên ADNyê yên li ser parzûnê baştir were girtin, 30% îzopropanol dikare were zêdekirin ku piştî hilweşandina çîçekê di şikê de germ bibe.

7. Berî ku eluentê lê zêde bike, stûna çend deqeyan (nêzîkî 10 hûrdeman) li germahiya odeyê bihêle da ku etanolê bi tevahî biherike.

8. Di dawiyê de, kêm eluent lê zêde bike da ku qebareya vegerandinê kêm bike.Bi gelemperî, 30-50 μl eluent ji bo şuştinê tê bikar anîn (ne pir hindik, wekî din ew ê nikaribe membranê şil bike, ku ji şûştinê re ne alîkar e);dilopên helandinê di navenda parzûnê de ne, ji bo ku ADN-ya ku bi parzûnê ve girêdayî ye bi tevahî bişon.

9. Piştî lêzêdekirina eluentê, ew dikare 5 hûrdeman di hemamek avê ya 55 dereceyan de were şuştin an jî ji 10 hûrdeman zêdetir di hemamek avê ya 50 dereceyan de were danîn, an jî di şevekê de bi parafilmek li 4 dereceyan were girtin, û dûv re ji bo başbûnê roja din were santrîfuj kirin, bandor baş e.

10.Eluateya santrîfujkirî dîsa li stûna adsorbasyonê zêde bikin û dîsa santrîfuj bikin.

Rêbaz û prosedurên hûrgulî ji bo vegerandina hilberê PCR

1. Vezîvirandina lastîkî ya asayî

Heke hûn dixwazin zencîreyê paşde bikin, çêtirîn e ku hûn kîtekek bikar bînin, ku rehet e û rêjeyek başbûnê hinekî zêde heye.Heke hûn bi rastî hewce ne ku wê bi destan vegerînin, hûn dikarin piştî qutkirina zencîreyê 3 qatên TE zêde bikin.Piştî ku di hemamek avê de dihele, fenol, fenol/kloroform bi paqijî têne derxistin, û etanol tê rijandin.Her eve.

2. Vegerandina DNA ji gêlên nizm ên xala helandinê

Paqijkirina Parçeyên ADNyê TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) bi qasî qebareya gêlê lê zêde bikin û 5 hûrdeman têxin nav hemamek avê ya 65°C da ku gel bi tevahî bihele.

Piştî ku ew gihandin germahiya jûreyê, miqdarek fenolê (bi TE têrbûyî, TE di qata jor de hat girtin, û tebeqeya jêrîn a fenolê jê hat rakirin) hat zêdekirin, û tevlihev bi nermî hate tevlihev kirin (ne hewceyî tevlihevkirinê), û 3 hûrdeman di 12,000 rpm de santrîfuj kirin.1-2 caran dubare bikin.

Spernatant hildin, 0,1 cild 3mol/L acetate sodyûm (pH 5,2) û 2,5 qatê qebareya mutleq a etanol lê zêde bikin da ku barîna etanolê pêk bînin.ADNya paqijkirî bi mîqdarek TE ya guncav hilweşînin, naverokê bipîvin û ji bo karanîna amade bikin (ew dikare ji bo analîza strukturên genê armanc, amadekirina sondajê, hwd.) were bikar anîn.

3. Vejandina PCR bi taybetmendiya amplifikasyonê ya baş

Ger taybetmendiya zêdekirina PCR baş e, ew tenê paqijkirin û vegerandina hilberê PCR-ê hêsan e.Hûn dikarin 50 ug/ml proteînaza K li hilbera PCR zêde bikin, 1h 37 dereceyan, carekê bi fenolê/kloroformê derxin, carekê bi kloroformê derxin, û 0,1 cild ji supernatantê lê zêde bikin.Acetate sodyûm bi barîna bi 2,5 cildên etanolê mutleq hat hilanîn.

Berhemên têkildar:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/