Transkriptazên berevajî yên kevneşopî nikarin germahiyên bilind tehmûl bikin (germahiya çêtirîn ji bo çalakiya MMLV 37-50 ° C, û AMV 42-60 ° C ye).RNA-ya vîrusê ya tevlihevtir nikare di germahiyên nizm de bi rengek bandor li cDNA-yê were veguheztin, û di encamê de karîgeriya tespîtkirinê kêm dibe.RT-qPCR ya kevneşopî bi gelemperî hewceyê beşdariya du enzîmên sereke (transkrîptaza berevajî û DNA polîmeraza) hewce dike, ku ne gengaz e ku xebata pergala reaksiyonê hêsan bike û lêçûn kêm bike.Li vir em ê du transkriptaseyên berevajî-berxwedêr ên germahiya bilind, TtH û RevTaq bidin nasîn.Van her du enzîman di heman demê de fonksiyona DNA polymerase jî heye, ji ber vê yekê ji wan re enzîmên bifunctional tê gotin.

TtH DNA polîmeraz

Pêdivî ye ku we di derbarê TtH de bihîstibe, ku ji bakteriya thermophilic Thermus thermophilus HB8 tê wergirtin.Di hebûna kationên duvalent ên wekî Mg2+ de, ew xwedan çalakiya DNA polymerase ye.Ew bi berfirehî di reaksiyonên PCR-ê de mîna enzîma Taq tê bikar anîn, lê ew ji enzîma Taq-ê berxwedana germê bilindtir e, ji ber vê yekê ew bi şablonên naveroka GC-ya bilind re jî bandorek çêtir li ser PCR heye.

· Ev enzîm di bingeh de xwedan çalakiya 3'→5' exonukleaz û 5'→3' exonukleaz nîne, ji ber vê yekê ew dikare ji bo rêzgirtina dideoksî jî were bikar anîn.

· Ev enzîm xwedî çalakiya RTase ye.Di hebûna Mn2+ de, dê çalakiya RTase zêde bibe.Bi karanîna vê taybetmendiyê, ew dikare were bikar anîn da ku reaksiyona veguheztina berevajî û reaksiyona PCR di heman boriyê de, ango RT-PCR-ya yek-gavekî pêk bîne.Lêbelê, di hebûna Mn2+ de, rastbûna RT-PCR ne zêde ye.Têkiliya çalakiya RT bi çalakiya rnaase H re tune.

· Zêdebûna çalakiya Tth-DNA polymerase (pH9, optimum +55℃~70℃, herî zêde +95℃) pirsgirêkên ku ji hêla avahiya duyemîn a RNA ve têne çêkirin derbas dike.CDNA ya ku derketî dikare bi PCR bi heman enzîmê di hebûna îyonên Mg2+ de were zêdekirin.

· Kapasîteya Tth-DNA polîmerazê ku di germahiyên bilind de veguheztina berevajî û zêdekirina DNA-yê pêk tîne, vê enzîmê ji bo RT-PCR-ya mîqdar, klonkirin, û analîza derbirrîna genê ya RNA-ya hucreyî û vîrusê bikêr dike.
· Tth-DNA polymerase ji bo RT-PCR tê bikaranîn ku RNA heta 1kb zêde bike.

Taybetmendî û avantajên

Tth DNA polymerase:

• Di reaksiyona RT-PCR de herî kêm 1000 bp mezinahiya hilberê ya reaksiyona zincîra polîmerazê (PCR) ya xweşbîn bikin.

• Trifosfata deoksîrîbonukleosîdê ya guhertî wekî substrat qebûl bikin

• Ne girêdayî çalakiya RNase H ye

• Xwedî îstîqrara germî ya bilind e ji bo derbaskirina pirsgirêkan, bi gelemperî bi avahiya navîn a bilind a ku di RNA de heye ve girêdayî ye

RevTaq RT-PCR DNA polymerase

Polîmeraza DNA ya berxwedêr a germê ya bi çalakiya transkrîptaza berevajî

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase enzîmek endezyarî, pir berxwedêr, li hember germê, du fonksiyonel e ku bi çalakiyên transkriptase berevajî û DNA-yê polîmeraza ku bi pêşveçûna rêwerz û çêkirî ve hatî wergirtin e.

· Nîv-jiyana RevTaq RT-PCR DNA polymerase di 95°C de ji 40 hûrdeman mezintir e.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase destûrê dide veguheztina berevajî ya germahiya bilind rasterast ji şablonê RNA, û gava veguheztina berevajî dikare gelek caran were dubare kirin da ku bêtir şablonên cDNA çêbike.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase destûrê dide RT-PCR-a "sifir-gaveke" (bê gavê veguheztina berevajî ya îzotermîk), ji ber ku di qonaxa dirêjkirina PCR-ya çerkî de, veguheztina berevajî û zêdekirina DNA bi hevdemî pêk tê.Ev di heman demê de reaksiyona veguheztina berevajî di germahiyên bilind de pêşve dike, bi vî rengî pirsgirêkên ku di helandina avahiya duyemîn a bihêz a RNA de di germahiyên bilind de rû didin kêm dike.

· Ji ber formula destpêkirina germ a li ser bingeha aptamer, RevTaq RT-PCR DNA polymerase dê encamên çêtir çêbike dema ku germahiya lêdan û dirêjkirinê ji 57 °C bilindtir be.

· Ji ber ku enzîm li hember germê berxwedêr e, tê pêşniyar kirin ku primer û sondajên bi xalên helînê yên pir bilind (>60°C) werin sêwirandin.

· Tê pêşniyar kirin ku di dema pêvajoya sazkirinê ya reaksiyonê de germahiya gavê annealing / dirêjkirinê bi navgîniyek germahiyê xweş bikin.

· Germahiya bilind, taybetmendiya PCR bilindtir dibe.Çêleka veguheztina berevajî bi gelemperî li germahiyek ji çerxa PCR-ê bilindtir tê kirin, ji ber ku hîbrîdîzasyona şablonê DNA Primer: RNA bi gelemperî xala helandinê ji DNA Primer:cDNA Şablon dupleks heye.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase bi genetîkî ve hatî çêkirin û xweşbîn kirin, û mezinahiya amplicon di navbera 60-300 bp de ye.

RevTaq RT-PCR sînorê tespîtkirina polymerase DNA digihîje 4 kopî/

Pergala reaksiyonê ya optimîzekirî (avakirina primerên xala helîna bilind) di wêneyê de tê xuyang kirin.RevTaq RT-PCR DNA-ya RT-PCR-a-polymerase-a ajoker hesasiyet çêtir nîşan dide ji tevliheviya sereke ya TaqPath 1-gaveke RT-qPCR, û gradienta dilopkirina Nimûneyê ya nizimtir nîşan dide.

Zêdetir avantajên:

Fonksiyona destpêkirina bilez → Pêngava denaturasyona germî ya destpêkê dikare were paşguh kirin.

Formula aptamera germ-destpêk → 100% çalakiya enzîmê tavilê peyda bike û pêşî li zêdekirina ne-taybetî li germahiyên nizm (<57°C) bigire.

Fonksiyona veqetandinê → Pêngava derxistina RNA ji holê tê rakirin, ji ber ku RevTaq RT-PCR DNA polymerase jî dikare nimûneyên reaksiyonê yên xav jî pêvajoyê bike.Ew dikare tavilê membranên hucreyên eukaryots, bakterî û vîrusan di çerxek germ a RT-PCR de hilweşîne.

Asta madeya xav a IVD → standardên kalîteya bilind û bihayên pir pêşbazî