RNase peyvek hestiyar e ku gelek xwendekarên ku pir caran ceribandinên derxistina RNA dikin naxwazin bibihîzin.Bi tevahî çekdarî, ARNya ku di dawiyê de bi reagentên pir jehrî fenol û kloroform hate derxistin, hate hilweşandin.Ez li hev nayêm!!!Werin em îro li eslê Rnase yê navdar binêre.

Ribonukleaz (RNase), an jî RNase, nukleazek e ku dikare ARNyê di molekulên piçûk de hîdrolîz bike.RNase, wekî proteînek molekulek piçûk, bi rengek neasayî aram e .Germahiya bilind û tansiyona bilind a sterilîzasyona buharê û astengkerên proteîn ên kevneşopî nikarin wê bi tevahî neçalak bikin.Stabiliya RNase bi giranî ji bendên disulfîdê yên di strukturê de tê.Mînakî, RNase ya pankreasê ya ku bi gelemperî tê bikar anîn tenê 124 asîdên amînî hene, lê 4 bendên dîsulfîdê dihewîne.Girêdana sulfur û girêdana dîsulfîdê RNase bi îstîqrara germî ya hêja vedigire.Wekî din, rnase xwedan giraniyek molekularî ya piçûk e û dikare di pir rewşan de zû vesazkirina xweya orjînal vegerîne.

Ji bilî ku pir bi îstîqrar e,RNase di laboratûvarê de li her derê hene .RNase mekanîzmayek parastinê ya biyolojîk e.Ji bo şaneyek, ARN-ya exogenous pir caran kujer e.Li gorî ADN-ya eksogenous, ARN-ya biyanî bi gelemperî xeternaktir e.ARN bi bextewarî tê transkrîbekirin û wergerandin, ji ber vê yekê hema hema hemî organîzmayan RNase çê kirine da ku li hember êrişa ARN-ya eksogenous biparêzin.Ji ber vê yekê, hucreyên bakterî yên ku di laboratûarê de têne çandin û hûn ên ku RNA derdixin, bîhna RNase derdixin.Di şikilên laşê mirovan de (şeq, hêsir, hwd.) rêjeyek mezin RNase heye, ji ber vê yekê dema ku ARN hilweşe negirîn.Her ku hûn bêtir digirîn, hilweşîna ARNyê ew qas xirabtir dibe!!Xwişka Daiyu ji bo derxistina RNA ne guncan e!

Wekî din, çermê weya nazik di heman demê de gelek RNase jî dihewîne, û nîşanker, pîpet, deriyên sarincê û destikên deriyên ku bi çerm hatine destgirtin jî RNase hene.

Digel ewqas tevlihevî, ka em mêze bikin ka meriv çawa bi RNases re mijûl dibe.

Yekem tiştê ku her kes dema ku RNA jê dike difikire ev eDEPC(Diethyl pyrocarbonate).DEPC bi giranî proteînê denature dike bi zengila imidazole ya koma çalak a RNase histidine re, bi vî rengî çalakiya enzîmê asteng dike.0.1% DEPC dikare bandorek rakirina çêtir li ser Rnase hebe, lê pêdivî ye ku em bala xwe bidin ku DEPC kanserojenek naskirî ye, ji ber vê yekê dema karanîna wê divê baldariyek taybetî were dayîn.

Ji bo RNase, divê em ji du aliyan ve dest pê bikin,ya yekem astengkirina çalakiya RNase ya endogenous e

Reagentên derxistina RNA yên kevneşopî yên wekî guanidine isothiocyanate û DTT ku di Trizolê de hene dikarin girêdana disulfîdê ya RNase vekin, lê hîn jî hin RNase hene, nemaze di nimûneyên tevnê de, ji ber vê yekê bala xwe bidin germahiya nizm.

1.Piştî derxistina wê tavilê nimûneya tevnê têxin nav nîtrojena şil, an jî di çareseriyek parastina RNA ya bazirganî de.

2.Piştî derxistina RNA ya nimûneya şaneyê, wê têxin nav çareya lîzê û li ser qutiya qeşayê bihêlin.

3. Çêtir e ku meriv nîtrojena şil ji bo qirkirinê bikar bîne dema ku nimûneyên tevneyê homojen dibin.Dema ku homojenîzatorek elektrîkê bêyî nîtrojena şil bikar tînin, bala xwe bidin ku adapterê homojenate bi tevahî pêş-sar bikin.

Ya duyemîn DNase egogenous e

1.Bi tevahî çekdar bin, kirasê laboratûwarê li xwe bikin, maskek li xwe bikin, û teqez cotek destmalên nû li xwe bikin (ew qas bihadar nebin!! Divê were zanîn ku Trizol super zerar e, û di nav destanan de jî pir bi hêz e, ji ber vê yekê di destên xwe de dilop nekin).

2.Pêdivî ye ku hemî serişteyên pipetê yên têne bikar anîn, boriyên EP, lûleyên PCR û alavên din werin derman kirin.Ew dikare di 0.1% DEPC de were şil kirin û dûv re di bin tansiyona bilind de were pêçandin.Bala xwe bidin operasiyona di fume hood.Zalimên herêmî dikarin rasterast ji bo rakirina enzîman madeyên vexwarinê bikirin.

PS: Bihêle ez ji we re rêbazek lazî bibêjim.Her çend germahiya bilind û tansiyona bilind bi tevahî nikaribin RNase ji holê rakin, ew ê beşek mezin jê rake.2 caran germahiya bilind û zexta bilind bandorek baş heye, û derxistina ARNyê jî kêm bandorek dike.

3.Alkol dikare proteînan deranse bike,ji ber vê yekê tabloya derxistina ARNyê dikare bi %75 alkolê were paqij kirin , û destmal jî dikarin bi alkolê bêne rijandin.

4.Divê çareseriya RNA ya dawîn û lûleya santrîfujê jî ji-RNase were derman kirin.Ava DEPC çareseriyek hilweşandina RNA ya bi gelemperî tê bikar anîn.Ka em li ser rêbaza amadekirina rast a ava DEPC biaxivin (ji bîr mekin ku gava hûn wê bikirin DEPC-ya bazirganî ji nû ve pak bikin)

DEPC di saet 1:1000 de li ava ultrapaqij zêde bikin, baş bihejînin, bihêlin şevekê li 37°C bisekine, û di 121°C de di bin germahîya bilind û zexta bilind de 15 hûrdeman steril bikin.Ava DEPC dikare li -20°C di 1 ml aliqut de were hilanîn.

Di dawiyê de, bi kurtasî: germahiya nizm ya sereke ye, vexwarin baş têne xebitandin, bi tevahî çekdar û kêm axaftin!

Belê, ji bo stratejiya îro ev e.Ez ji we re hemî tevliheviya RNA û paqijiya ku we behs kir dixwazim.Herdu A260/A280 2.0 in!!!

Bê guman, heke hûn a bikar bîninKit derxistina RNA operasyona germahiya odeyê, dibe ku hûn bi pirsgirêkên jorîn re rûbirû nebin.

Operasyona li germahiya odeyê, bêyî ku DNase zêde bike, di 11 hûrdeman de RNA tevahî ji şaneyan derdixe, û di 30 hûrdeman de RNA tevahî ji tevnên heywanan an nebatan derdixe.

Ji bo nimûneyên ceribandinê, ji kerema xwe têkilî:overseas@foregene.com

Berhemên Têkildar:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/