Ji bo Tîs û Şaneya Heywanê Kitên Derxistin û Paqijkirina RNA-ya Tevahiya Heywanan
Kit Description:
Zû û bikêrhatî RNA-ya tevahî ya paqijiya bilind û bi kalîte ji tevnên cûrbecûr yên heywanan derdixin.
Ne hewce ye ku meriv li ser hilweşandina ARN-ê bixebite.Tevahiya pergalê RNase-Free ye
Bi karanîna Stûna Paqijkirina DNA-yê bi bandor DNA-yê jêbirin
Bêyî zêdekirina DNase ADNyê jê bikin
Hêsan - hemî operasyon di germahiya odeyê de têne qedandin
Zû - operasyon dikare di 30 hûrdeman de were qedandin
Ewle - reagentek organîk nayê bikar anîn
Paqijiya bilind-OD260/280≈1.8-2.1
Kits Danasîna
50 Amadekirin, 200 Amadekirin
Ev kît bi kar tînestûna spin û formulaku ji hêla pargîdaniya me ve hatî pêşve xistin, ku dikare RNA-ya tevhev a paqijiya bilind û bi kalîte ji tevnên heywanan ên cûrbecûr bi karîgerîyek bilind derxîne. Ew Stûnek Paqijkirina DNA-ya bikêr peyda dike, ku dikare bi hêsanî DNA-ya genomîk ji supernatant û lîzata tevnvîsê veqetîne û derxe, hêsan û dem-teserûf dike;Stûna tenê-ARN dikare RNA-yê bi bandor ve girêbide û dikare bi formûlek bêhempa bi hevdemî were xebitandin Gelek nimûne.
Tevahiya pergal Bê-RNase ye, ji ber vê yekê RNA-ya ku tê derxistin nayê hilweşandin;Tampon RW1, Pergala şuştina tamponê ya tampon RW2, da ku ARNya ku tê bidestxistin ji proteîn, DNA, îyon û qirêjiya pêkhateya organîk bêpar be.
pêkhateyên Kit
| Animal Total Isolation RNA Kit | ||
| pêkhateyên Kit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Tampon RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampon RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Tampon RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampon RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH2O Bê-RNase | 10 ml | 40 ml |
| Stûna RNA-tenê | 50 | 200 |
| Stûna Paqijkirina DNA | 50 | 200 |
| Manual Instruction | 1 perçe | 1 perçe |
Agahiya hilberê
| Çap | Stûna Spin | Parçeyek paqijkirinê | Stûna Foregene, reagent |
| Flux | 1-24 nimûne | Dem ji bo amadekariyê | ~ 30 min (24 nimûne) |
| Centrifuge | Desk centrifuge | Veqetandina Pyrolysis | Veqetandina centrifugal |
| Mînak | tevna heywanan;hûcre | Mîqdara nimûneyan | Tissue:10-20 mg;Şane:(1-5)×106 |
| volume Elution | 50-200 μL | Hêjmara barkirinê ya herî zêde | 850 μL |
Taybetmendî & avantajên
■ Ne hewce ye ku li ser hilweşandina ARN-ê xemgîn bibin;tevahiya pergalê RNase-Fee ye
■ Stûna Paqijkirina ADN-ya ku ADN-ê bikar tîne bi bandor derxînin
■ Bêyî ku DNase lê zêde bike ADNyê jê bikin
■ Hemî operasyonên hêsan di germahiya odeyê de têne qedandin
■ Operasyona bilez dikare di 30 hûrdeman de were qedandin
■ Reagenta organîk a ewle-ne hewce ye
■ Paqijiya bilind -OD260/280≈1.8-2.1
sepanê Kit
Ew ji bo derxistin û paqijkirina RNA-ya tevahî ji cûrbecûr tevnên heywanên teze an cemidî an şaneyên çandî re maqûl e.
Parametreyên hilberê
■ Serîlêdanên jêrîn: senteza cDNA-ya yekem, RT-PCR, klonkirina molekulî, Northern Blot, hwd.
■ Nimûne: destmalên heywanan, şaneyên çandî
■ Dosage: Tîlan 10-20mg, Hucre (2-5)×106
■ Kapasîteya girêdana DNA ya herî zêde ya stûna paqijkirinê: 80 μg
■ Hêjmara helandinê: 50-200 μl
Dîyagram
Animal Total RNA Isolation Kit 20 mg tê derman kirin
Nimûneyên mişkê yên nû, 5% RNA ya tevahî paqijkirî 1% agar bigirin
Elektroforeza Glycogel
1: Sleen 2: Gurçik
3: Kezeb 4: Dil
Storage û jiyana refikê
Kit dikare 24 mehan li germahiya odeyê (15-25 ℃) an jî 2-8 ℃ ji bo demek dirêjtir were hilanîn.Tampon RL1 piştî lê zêdekirina β-merkaptoetanol (vebijarkî) 1 meh dikare li 4 ℃ were hilanîn.
Gotarên binavkirî
1.IF: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Nanopartîkên Mîna Lîpîd-Berkirî yên mRNA-yê ji bo Guhertina Bingeha Kezebê Bi Veguheztina Sêwirana Pêkhatî ya Navendî.Adv.Funct.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF: 18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Apoptoza spontan a hucreyan di amadekirina hucreya stûnê ya dermankirî de bi serbestberdana fosfatîdylserine re bandorên immunomodulatory dike.Target Transduct Signal Ther.2021 tîrmeh 14; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Guhertina tRNA ya N7-Methylguanosine wergerandina mRNA-ya onkojenîk zêde dike û pêşkeftina cholangiocarcinoma intrahepatîk pêşve dike.Mol Cell.2021 tîrmeh 29: S1097-2765 (21) 00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Guhertina m6A ya Mettl14-Navbeynkar, Vejenkirina Kezebê bi Xweparastina Homeostasis Retîkûlma Endoplazmî re Asantir dike.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021; 12 (2): 633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kîtên îzolasyona RNA ji bo çavkaniyên nimûneyên dinhene:
Xane, nebat, vîrus, xwîn û hwd.
ARN nayê derxistin an jî berhemên ARN kêm in
Bi gelemperî cûrbecûr faktor hene ku bandorê li kargêriya vegerandinê dikin, wek: naveroka RNA ya nimûneya tevnê, awayê xebitandinê, qebareya avêtinê, hwd.
1. Di dema operasyonê de santrîfujasyona qeşayê an jî kryojenîk (4 °C) hate kirin.
Pêşniyar: Di tevahiya pêvajoyê de li germahiya odeyê (15-25 ° C) bixebitin, hemamê qeşayê nekin û di germahiyên nizm de santrîfuj nekin.
2. Parastina nimûneya nerast an dema hilanîna nimûneyê ya zêde.
Pêşniyar: Nimûneyan di -80 °C de hilînin an jî di nîtrojena şil de bicemidînin û ji dubarekirina cemidî-germkirinê dûr bixin;hewl bidin ku ji bo derxistina RNA tevna nû an şaneyên çandî bikar bînin.
3. Nimûneya lîza ne bes.
Pêşniyar: Dema homojenkirina tevnvîsê, pê ewle bin ku tevnek têra xwe homojenkirî ye û şaneyên tevneyê bi têra xwe perçe dibin da ku serbestberdana RNA rave bikin.
4. Elewîtî rast nayê zêdekirin.
Pêşniyar: Piştrast bikin ku RNase-Bê ddH2O bi dilopî li nîvê parzûna stûna paqijkirinê tê zêdekirin.
5. Hêjmara rast a etanolê mutleq li Buffer RL2 an Buffer RW2 nehat zêdekirin.
Pêşniyar: Rêwerzan bişopînin, hêjmara rast a etanolê ya mutleq li Buffer RL2 û Buffer RW2 zêde bikin û berî ku kîtê bikar bînin baş tevlihev bikin.
6. Doza nimûneya tîrêjê ne guncaw e.
Pêşniyar: 10-20 mg tevnî an (1-5) × 10 bikar bînin6hucreyên li ser 500 μl tampon RL1, ji ber ku karanîna zêde ya tevnê dikare bibe sedema kêmkirina derxistina RNA.
7. Hêjma elutionê ya nerast an elution netemam.
Pêşniyar: Hêjeya avêtina stûna paqijkirinê 50-200 μl e;heke bandora helandinê ne têrker be, tê pêşniyar kirin ku dema danîna germahiya odeyê piştî zêdekirina ddH-ya Bê-RNase-ya pêş-germkirî dirêj bikin.2O, mînak ji bo 5-10 min.
8. Stûna paqijkirinê piştî şuştina Buffer RW2 bermayiya etanolê heye.
Pêşniyar: Ger piştî şuştina Buffer RW2 bermayiya etanolê hebe, santrîfujkirina lûleya vala 1 hûrdem, dema xebata santrafîjasyona lûleya vala dikare heya 2 hûrdem were zêdekirin, an jî stûna paqijkirinê dikare 5 hûrdem li germahiya odeyê were danîn da ku bi têra xwe etanola mayî were rakirin.
ARN ya safîkirî tê hilweşandin
Qalîteya RNA-ya paqijkirî bi faktorên wekî parastina nimûneyê, qirêjiya RNase, û manipulasyon, hwd ve girêdayî ye.
1. Nimûneyên tîrêjê di wextê de nayên girtin.
Pêşniyar: Ger nimûneyên tevnvîsê an şaneyên piştî berhevkirinê di wextê xwe de neyên bikar anîn, tavilê di -80 °C an nîtrojena şil de kriyoparastinê bikin.Ji bo derxistina RNA, gava ku gengaz be, tevnek an nimûneyek şaneyek nû hatî girtin bikar bînin.
2. Berberî cemidî-helandina nimûneyên tevnvîsê.
Pêşniyar: Dema ku nimûneyên tevnê hilanîn, çêtir e ku meriv wan bike perçeyên piçûk ji bo parastinê, û gava ku wan bikar tîne yek ji wan perçeyan jê derxîne da ku ji dûbarebûna cemidî-germbûna nimûneyê û hilweşîna ARNyê dûr bisekine.
3. Di dema operasyonê de RNase tê destnîşan kirin an ne lixwekirina destmalên yekcar, mask, hwd.
Pêşniyar: Ceribandinên derxistina ARNyê çêtirîn li odeyên manîpulasyonê yên RNA yên cihê têne kirin û tablo berî ceribandinê were paqij kirin.
Di dema ceribandinê de destik û maskên yekcar li xwe bikin da ku hilweşîna RNA ya ku ji ber danasîna RNase pêk tê kêm bike.
4. Reagent di dema karanîna de bi RNase ve têne qirêj kirin.
Pêşniyar: Ji bo ceribandinên têkildar Kitek nû ya Veqetandina RNA ya Tevahiya Heywanan biguhezînin.
5. Tîpên santrîfujê, tîp û hwd ku di manîpulasyona ARNyê de tên bikaranîn bi RNase gemarî ne.
Pêşniyar: Piştrast bikin ku lûleyên santrîfujê, tîp, pîpet, hwd. yên ku di derxistina RNA de têne bikar anîn, hemî bê RNase ne.
RNA-ya ku hatî paqij kirin bandorê li ceribandinên jêrîn dike
RNA ya ku ji hêla stûna paqijkirinê ve hatî paqij kirin, heke îyonên xwê, naveroka proteîn pir mezin be dê bandorê li ezmûna jêrîn bike, wek: veguheztina berevajî,Northern Blot et al.
1. Di ARNya ku hatiye helandin de bermayiyên îyonên xwê hene.
Pêşniyar: Tesdîq bikin ku hêjmara rast a etanolê li Buffer RW2 hatiye zêdekirin û 2 şuştinên stûnên paqijkirinê bi leza centrifûgal a ku ji bo xebatê hatî destnîşan kirin pêk bînin;heke bermayek îyona xwê hebe, stûna paqijkirinê 5 hûrdem li germahiya odeyê li Buffer RW2 bihêlin û santrîfujasyonê bikin da ku rakirina qirêjiya xwê herî zêde bikin.
2. Di ARN-ê de bermayiya etanolê.
Pêşniyar: Piştrast bikin ku piştî şuştina tampon RW2, operasyona santrîfujasyonê ya lûleya vala bi leza santrîfujasyonê ya ku ji bo xebitandinê hatî destnîşan kirin pêk bînin, dema xebata santrîfujasyonê ya lûleya vala heya 2 hûrdem zêde bikin ger hêj bermayiya etanolê hebe, an jî piştî santrîfujasyona lûleya vala 5 hûrdeman bihêlin ku ji nû ve rakirina santrafûjasyonê zêde bikin.
