Pirs û Pirs ji boKîta îzolasyona RNA ya Tevahiya Heywanan

Analîzên jêrîn ên pirsgirêkên ku hûn dikarin tê de rû bi rû bimînintevna heywanan / RNA şaneyê derxistin will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

ARN nayê derxistin an jî berhemên ARN kêm in

Bi gelemperî cûrbecûr faktor hene ku bandorê li kargêriya vegerandinê dikin, wek: naveroka RNA ya nimûneya tevnê, awayê xebitandinê, qebareya avêtinê, hwd.

1. Di dema operasyonê de santrîfujasyona qeşayê an jî kryojenîk (4 °C) hate kirin.

Pêşniyar: Di tevahiya pêvajoyê de li germahiya odeyê (15-25 ° C) bixebitin, hemamê qeşayê nekin û di germahiyên nizm de santrîfuj nekin.

2. Parastina nimûneya nerast an dema hilanîna nimûneyê ya zêde.

Pêşniyar: Nimûneyan di -80 °C de hilînin an jî di nîtrojena şil de bicemidînin û ji dubarekirina cemidî-germkirinê dûr bixin;hewl bidin ku ji bo derxistina RNA tevna nû an şaneyên çandî bikar bînin.

3. Nimûneya lîza ne bes.

Pêşniyar: Dema homojenkirina tevnvîsê, pê ewle bin ku tevnek têra xwe homojenkirî ye û şaneyên tevneyê bi têra xwe perçe dibin da ku serbestberdana RNA rave bikin.

4. Elewîtî rast nayê zêdekirin.

Pêşniyar: Piştrast bikin ku RNase-Bê ddH₂O bi dilopî li nîvê parzûna stûna paqijkirinê tê zêdekirin.

5. Hêjmara rast a etanolê mutleq li Buffer RL2 an Buffer RW2 nehat zêdekirin.

Pêşniyar: Rêwerzan bişopînin, hêjmara rast a etanolê ya mutleq li Buffer RL2 û Buffer RW2 zêde bikin û berî ku kîtê bikar bînin baş tevlihev bikin.

6. Doza nimûneya tîrêjê ne guncaw e.

Pêşniyar: 10-20 mg tevnî an (1-5) × 10 bikar bînin⁶hucreyên li ser 500 μl tampon RL1, ji ber ku karanîna zêde ya tevnê dikare bibe sedema kêmkirina derxistina RNA.

7. Hêjma elutionê ya nerast an elution netemam.

Pêşniyar: Hêjeya avêtina stûna paqijkirinê 50-200 μl e;heke bandora helandinê ne têrker be, tê pêşniyar kirin ku dema danîna germahiya odeyê piştî zêdekirina ddH-ya Bê-RNase-ya pêş-germkirî dirêj bikin.₂O, mînak ji bo 5-10 min.

8. Stûna paqijkirinê piştî şuştina Buffer RW2 bermayiya etanolê heye.

Pêşniyar: Ger piştî şuştina Buffer RW2 bermayiya etanolê hebe, santrîfujkirina lûleya vala 1 hûrdem, dema xebata santrafîjasyona lûleya vala dikare heya 2 hûrdem were zêdekirin, an jî stûna paqijkirinê dikare 5 hûrdem li germahiya odeyê were danîn da ku bi têra xwe etanola mayî were rakirin.

ARN ya safîkirî tê hilweşandin

Qalîteya RNA-ya paqijkirî bi faktorên wekî parastina nimûneyê, qirêjiya RNase, û manipulasyon, hwd ve girêdayî ye.

1. Nimûneyên tîrêjê di wextê de nayên girtin.

Pêşniyar: Ger nimûneyên tevnvîsê an şaneyên piştî berhevkirinê di wextê xwe de neyên bikar anîn, tavilê di -80 °C an nîtrojena şil de kriyoparastinê bikin.Ji bo derxistina RNA, gava ku gengaz be, tevnek an nimûneyek şaneyek nû hatî girtin bikar bînin.

2. Berberî cemidî-helandina nimûneyên tevnvîsê.

Pêşniyar: Dema ku nimûneyên tevnê hilanîn, çêtir e ku meriv wan bike perçeyên piçûk ji bo parastinê, û gava ku wan bikar tîne yek ji wan perçeyan jê derxîne da ku ji dûbarebûna cemidî-germbûna nimûneyê û hilweşîna ARNyê dûr bisekine.

3. Di dema operasyonê de RNase tê destnîşan kirin an ne lixwekirina destmalên yekcar, mask, hwd.

Pêşniyar: Ceribandinên derxistina ARNyê çêtirîn li odeyên manîpulasyonê yên RNA yên cihê têne kirin û tablo berî ceribandinê were paqij kirin.

Di dema ceribandinê de destik û maskên yekcar li xwe bikin da ku hilweşîna RNA ya ku ji ber danasîna RNase pêk tê kêm bike.

4. Reagent di dema karanîna de bi RNase ve têne qirêj kirin.

Pêşniyar: Ji bo ceribandinên têkildar Kitek nû ya Veqetandina RNA ya Tevahiya Heywanan biguhezînin.

5. Tîpên santrîfujê, tîp û hwd ku di manîpulasyona ARNyê de tên bikaranîn bi RNase gemarî ne.

Pêşniyar: Piştrast bikin ku lûleyên santrîfujê, tîp, pîpet, hwd. yên ku di derxistina RNA de têne bikar anîn, hemî bê RNase ne.

RNA-ya ku hatî paqij kirin bandorê li ceribandinên jêrîn dike

RNA ya ku ji hêla stûna paqijkirinê ve hatî paqij kirin, heke îyonên xwê, naveroka proteîn pir mezin be dê bandorê li ezmûna jêrîn bike, wek: veguheztina berevajî,Northern Blot et al.

1. Di ARNya ku hatiye helandin de bermayiyên îyonên xwê hene.

Pêşniyar: Tesdîq bikin ku hêjmara rast a etanolê li Buffer RW2 hatiye zêdekirin û 2 şuştinên stûnên paqijkirinê bi leza centrifûgal a ku ji bo xebatê hatî destnîşan kirin pêk bînin;heke bermayek îyona xwê hebe, stûna paqijkirinê 5 hûrdem li germahiya odeyê li Buffer RW2 bihêlin û santrîfujasyonê bikin da ku rakirina qirêjiya xwê herî zêde bikin.

2. Di ARN-ê de bermayiya etanolê.

Pêşniyar: Piştrast bikin ku piştî şuştina tampon RW2, operasyona santrîfujasyonê ya lûleya vala bi leza santrîfujasyonê ya ku ji bo xebitandinê hatî destnîşan kirin pêk bînin, dema xebata santrîfujasyonê ya lûleya vala heya 2 hûrdem zêde bikin ger hêj bermayiya etanolê hebe, an jî piştî santrîfujasyona lûleya vala 5 hûrdeman bihêlin ku ji nû ve rakirina santrafûjasyonê zêde bikin.

Veqetandina cureyên nimûneyên asîda nulceic

Kîtên îzolekirina RNA ya Foregene dikarin veqetandin/derxistina RNA ya tevahî ji çavkaniyên nimûneyên jêrîn bistînin: Tîma heywanan, nebat, hucre, vîrus, xwîn, hwd.

Ez çawa kîtê hilanim

Hilgirtina germahiya odeyê 24 mehan.