Stûn pêxist

Piştî ku stûn tê girêdan, hilberîna RNA kêm dibe an jî ne gengaz e ku RNA were paqij kirin, û girseya ARN ya ku tê bidestxistin kêm e.

Analîza sedemên hevpar:

1. Veqetandinên nimûne ne bi tevahî ne.

Şikandina nimûneyê bi tevahî nahêle ku STUNA PAQIKIRINA DNA-yê were asteng kirin, di heman demê de bandorê li hilber û kalîteya RNA dike.Dema ku hûn nimûneyan dişikînin, em operasyona rijandina bilez di nîtrojenek têr a şil de pêşniyar dikin, Biceribînin ku dîwarê hucreya nimûneyê, membrana hucreyê û tevnek din biperçiqînin.Ji bo nimûneyên nebatê yên polîsakkarîdên polîol, em pêşniyar dikin ku hûn Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS bikar bînin.

2. Dema ku sopernatantê mînaka veqetandî bi Stûna Paqijkirina ADN-ê tê mêşkirin, dibe ku şaneya perçebûyî ya muhtemel were nefehm kirin.

Daniyên perçebûyî yên hucreyê yên ku têne hilanîn dê bibe sedema stûna TENÊ ARN-ê ya ku dê dema ku operasyona adsorption ARN-ê were kirin were asteng kirin (li gav 6 binêre).Em ji we re bi baldarî pêşniyar dikin dema ku vê supernatantê bişon da ku dev ji mêjkirina bermahiyên hucreyê bernedin.

3. Mîqdara destpêkê ya nimûneyê pir zêde ye.

Bikaranîna zêde ya nimûneyê dê bibe sedema perçebûna nimûneyê ya netemam an jî lîza hucreyê ya bêkêmasî ji hêla Buffer PSL1 ve, û di encamê de stûna paqijkirinê di dema paqijkirinê de asteng dike.Kita îzolasyona RNA-ya tevahî ya nebatê Her nimûneya xebitandinê ya paqijkirî 50 mg e.Ji bo nimûneyên nebatê yên polîsakkarîdên polîol, em pêşniyar dikin ku hûn Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS biceribînin.

4. Germahiya santrîfujê pir kêm e.

Tevahiya pêvajoya veqetandin û paqijkirina RNA li germahiya odeyê (20-25) tê meşandin°C), ji bilî ku tevna nimûneyê bi nîtrojena şil tê şikandin.℃, ku dibe sedema astengkirina Stûna Paqijkirina ADN û/an Stûna Tenê-RNA.Ger ev yek bibe, germahiya santrîfujê li ser 20-25 saz bikin℃, ûPiştrast bikin ku têkelê lîzê û/an jî zêrê etanolê pêvekirî di 37 de hate germ kirin.°C.

ARN nayê derxistin an jî hilberîna RNA kêm e

Bi gelemperî gelek faktor hene ku bandorê li ser karbidestiya vegerandinê dikin, wek: naveroka RNA ya nimûne, rêbaza xebitandinê, qebareya helandinê, hwd.

Analîza sedemên gelemperî wekî jêrîn:

1.Di dema operasyonê de santrîfujasyonek qeşayê an germahiya nizm (4°C) hate kirin.

Pêşniyar: Li germahiya odeyê (15-25) bixebitin°C) Di tevahiya pêvajoyê de, serşokê berfê û santrîfujkirina germahiya nizm nekin.

2. ARN ji ber nelirêt parastinê ya nimûneyê an jî ji ber parastina demdirêj a nimûneyê hilweşiyaye.

Pêşniyar: Nimûneyên ku nû hatine berhevkirin divê zû di nîtrojena şil de werin cemidandin, û dûv re ji bo demek dirêj li -80°C werin hilanîn, xwe ji cemidandin û şilbûna dubare ya nimûneyan dûr bixin;an jî tavilê nimûneyan di çareseriya RNAlater (mînakên heywanan) stabîlîzkerê RNA de bihelînin.

3.Parçebûn û lîzkirina nimûneyê ne bes dibe sedema astengkirina stûna paqijkirinê.

Pêşniyar: Dema ku tevlê hûr bikin, ji kerema xwe pê ewle bibin ku tevnvîs bi têra xwe avî ye, û zû veguhezînin Tampona PSL1-a ku ji berê ve hatî amade kirin (pejirandin ku rêjeya rast a β-ME hatiye zêdekirin, li qonaxa 1 ya prosedurê binêre).

4.Eluent bi xeletî hate zêdekirin.

Pêşniyar: Piştrast bikin ku ddH2O-ya Bê-RNase di nîvê parzûna stûna paqijkirinê de tê avêtin.

5.Hejmara rast a etanola mutleq li Buffer PSL2 an Buffer PRW2 nehat zêdekirin.

Pêşniyar: Ji kerema xwe talîmatan bişopînin, hêjeya rast a etanolê ya mutleq li Buffer PSL2 û Buffer PRW2 zêde bikin û berî ku kît were bikar anîn baş tevlihev bikin.

6.Hejmara nimûneya tevnê negunca ye.

Pêşniyar: Ji bo 500 μl Buffer PSL1 50 mg tevlê bikar bînin.Bi karanîna pir tevnvîsê dê mîqdara ARN-ya ku tê derxistin kêm bike û paqijiya RNA-ya ku derketiye jî dê kêm bibe.Em bi tundî pêşniyar dikin ku dozaja nimûneya destpêkê divê ji 50 mg ji bo operasyona derxistina RNA derbas nebe.

7.Hejma elutionê ya neguncayî an elution netemam.

Pêşniyar: Hêjeya eluentê ya stûna paqijkirinê 50-200 μl e;heke bandora helandinê ne têrker be, tê pêşniyar kirin ku wextê li germahiya odeyê dirêj bikin piştî ku ddH2O-ya Bê-RNase-ya pêş-germkirî, wek 5-10 hûrdeman zêde bikin.

8.Stûna paqijkirinê piştî şuştina bi BufferPRW2 re bermahiyên etanolê heye.

Pêşniyar: Ger lûleya vala 1 hûrdeman were santrîfuj kirin û piştî şuştinê di Buffer PRW2 de hîn etanol maye, hûn dikarin dema santîfujasyona lûleya vala 2 hûrdeman zêde bikin, an jî stûna paqijkirinê 5 hûrdem li germahiya odeyê bihêlin da ku etanola bermayî bi tevahî jê bibe.

9.Kit xelet hat bikaranîn.

Pêşniyar: Ji bo nimûneyên nebatê yên polîsakkarîdên polîfenolîk, bi karanîna kîteyên hevpar ên wekî Kîta Veqetandinê ya RNA Total Plant dibe ku nikaribe nimûneyên RNA-ya îdeal bi dest bixe.Em ji we re pêşniyar dikin ku hûn Plant Total RNA IsolationKit Plus, ku bi taybetî ji bo nimûneyên nebatên polîsakkarîd ên polîfenolîk hatî çêkirin bikar bînin.Kîteyek ku bi taybetî ji bo derxistina RNA ji nimûneyên nebatê yên polîfenol û polîsakarîd hatî pêşve xistin.

Nirxa OD260/OD280 kêm e

Hilweşîna RNA ya bi ddH2O û ji bo xwendina spektrofotometer tê bikar anîn di nirxên OD260/OD280 de kêm dibe.Em pêşniyar dikin ku 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 bikar bînin (li şûna ddH2O-ya Bê-RNase ku RNA-yê bişewitîne) ji bo bidestxistina nirxên OD260/OD280-ê bi nisbî rast, li "Assasên Tevhevkirin û Paqijkirina RNA" li rûpela 19 binêre.

ARNya paqijkirî tê hilweşandin

Qalîteya RNA-ya paqijkirî bi faktorên wekî parastina nimûneyê, qirêjiya RNase, û manîpulasyonê ve girêdayî ye.

Analîza sedemên hevpar:

1.Nimûneyên Tissue piştî berhevkirinê di wextê de nehatin hilanîn.

Pêşniyar: Ger nimûneyên tevnvîsê piştî berhevkirinê di wextê xwe de neyên bikar anîn, ji kerema xwe wan tavilê di nîtrojena şil de di germahiya nizm de hilînin an ji bo hilanîna dirêj-dirêj piştî cemidandina bilez di nîtrojena şil de wan veguhezînin -80°C, an tavilê nimûneyan di nav çareseriya RNAlater a stabîlkerê RNA de bihêlin (mînakên heywanan).Ji bo derxistina RNA, hewl bidin ku nimûneyên tevnvîsê yên nû hatine berhev kirin bikar bînin.

2.Cimandin û helandina nimûneyên tevnê dubare kirin.

Pêşniyar: Dema ku nimûneyên tevnvîsê têne hilanîn, çêtir e ku ji bo parastinê ew di perçeyên piçûk de werin birîn û dema ku wan bikar tînin beşek ji wan derxin da ku ji hilweşîna ARNyê ya ku ji ber cemidandin û şilbûna dubare ya nimûneyan pêk tê, dûr bisekinin.

3.RNase di jûreya operasyonê de tê destnîşan kirin an jî destikên yekcar, mask, hwd nayên kişandin.

Pêşniyar: Ceribandinên derxistina RNA di operasyonên RNA yên cihêreng de çêtirîn têne kirin, û tabloya laboratûwarê divê berî ceribandinê were paqij kirin, û di dema ceribandinê de destmal û maskeyên yekcar bêne çikandin da ku ji xirabûna RNA ya ku ji hêla danasîna RNase-ê ve heta radeya herî mezin çêdibe dûr bisekinin.

4.Reagent di dema karanîna de ji hêla RNase ve tê qirêj kirin.

Pêşniyar: Ji bo ceribandinên têkildar rêzek nû ya kîtên derxistina RNA-ya tevahî ya nebatê biguhezînin.

5.Lîpên santrîfujê û lûleyên pîpetê yên ku ji bo manîpulasyona ARNyê tên bikaranîn, bi RNase gemarî ne.

Pêşniyar: Piştrast bikin ku lûleyên santrîfujê, lûleyên pîpetê, pîpet û hwd yên ku di derxistina ARNyê de têne bikar anîn hemî bê RNase ne.

Manuals Instruction:

Plant Total RNA Isolation Kit Plus Manual Instruction