Em çêkerê xwedî ezmûn bûne.Di sertîfîkayên girîng ên sûka xwe de ji bo Tenzîlatkirina Mezin a Chinaînê ya Hesasiya Bilind a Yek-Step Probe Rt-QpcrKit V2, Qalîteyê jiyana kargehê ye, Bala xwe bidin ser daxwaza xerîdar çavkaniya zindîbûn û pêşkeftina pargîdanî ye, Em bi dilsozî û helwesta xebatê ya dilpak tevdigerin, li hêviya hatina we ne!
Em çêkerê xwedî ezmûn bûne.Di sertîfîkayên girîng ên bazara xwe de ji bo piraniyê qezenc dikeÇîn Taq DNA Polymerase, Qpcr, Pargîdaniya me soz dide: bihayên maqûl, dema hilberîna kurt û karûbarê piştî firotanê ya têrker, em jî xêrhatina we dikin ku hûn di her kêliyê de ku hûn bixwazin biçin kargeha me.Xwezî niha em bi hev re karsaziyek xweş û dirêj hebe!!!

Danasîn

Ev kît pergalek tampon a lîzê ya yekta bikar tîne ku dikare zû RNA ji nimûneyên hucreya çandî ji bo reaksiyonên RT-qPCR azad bike, bi vî rengî pêvajoya paqijkirina RNA-yê ya dem-xebat û kedkar ji holê rake.Şablona ARNyê tenê di 7 hûrdeman de dikare were bidestxistin.Reajansên 5×Direct RT Mix û 2×Direct qPCR Mix-SYBR reagentên ku ji hêla kîtê ve têne peyda kirin dikarin zû û bi bandor encamên PCR-ya jimareyî yên rast-dem bistînin.

5×Direct RT Mix û 2×Direct qPCR Mix-SYBR xwedan tolerasyona înhîbîtor a bihêz in, û lîzata nimûneyan dikare rasterast wekî şablon ji bo RT-qPCR were bikar anîn.Di vê kîtê de transkrîptaza berevajî ya Foregene ya RNA-ya yekta-hevalbendiya bilind, û polîmeraza DNA ya Hot D-Taq, dNTPs, MgCl heye.₂, tampon reaksiyonê, optimîzator û stabîlîzkerê PCR.

Specifications

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

pêkhateyên Kit

Taybetmendî & avantajên

■ Hêsan û bi bandor: Bi teknolojiya Cell Direct RT, nimûneyên RNA tenê di 7 hûrdeman de têne wergirtin.

■ Daxwaza nimûneyê piçûk e, bi qasî 10 şaneyan dikarin werin ceribandin.

■ Rêjeya bilind: ew dikare zû RNA di şaneyên ku di lewheyên 384, 96, 24, 12, 6-kaniyan de hatine çandin, tesbît bike.

■ DNA Eraser dikare bi lez genomên serbest rabike, bandorê li ser encamên ceribandinên paşîn pir kêm bike.

■ Pergala RT û qPCR ya optimîzekirî transkrîpsyona berevajî ya RT-PCR-ya du-gavekî bikêrtir û PCR-ya taybetîtir, û li hember astengkerên reaksiyona RT-qPCR berxwedêrtir dike.

sepanê Kit

Qada serîlêdanê: şaneyên çandî.

- RNA ku ji hêla lîza nimûneyê ve hatî berdan: tenê ji bo şablona RT-qPCR ya vê kîtê tê sepandin.

- Kit dikare ji bo mebestên jêrîn were bikar anîn: analîzkirina vegotina genê, verastkirina bandora bêdengkirina genê ya bi navbeynkariya siRNA, vekolîna dermanan, hwd.

Dîyagram

Storage û Refê jiyana

Beşa I ya vê kîtê divê li 4℃ were hilanîn;Beşê II divê li -20℃ were hilanîn.

Foregene Protease Plus II divê di 4℃ de were hilanîn, di -20℃ de neyê cemidandin.

Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR divê di tariyê de li -20℃ were hilanîn;heke pir caran were bikar anîn, ew dikare di 4℃ de jî ji bo hilanîna demek kurt were hilanîn (di nav 10 rojan de bikar bînin).Di sertîfîkayên girîng ên sûka xwe de ji bo dakêşana Mezin a Chinaînê ya Kît-Qpcr Kit Rt-Qpcr V2, di sertîfîkayên girîng de qezenc dike, Qalîteyê jiyana fabrîkî ye, Bala xwe li ser daxwaziya xerîdar çavkaniya zindîbûn û pêşkeftina pargîdanî ye, Em bi dilsozî û helwêsta xebatê ya dilpak tevdigerin, li hêviya hatina we ne!
Daxistina mezinÇîn Taq DNA Polymerase, Qpcr, Pargîdaniya me soz dide: bihayên maqûl, dema hilberîna kurt û karûbarê piştî firotanê ya têrker, em jî xêrhatina we dikin ku hûn di her kêliyê de ku hûn bixwazin biçin kargeha me.Xwezî niha em bi hev re karsaziyek xweş û dirêj hebe!!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Kat.No.DRT-01021/01022

Ji bo hucreyê rasterast RT-qPCR bi karanîna ≤ 1000,000 hucreyan

danasîna Product

Ev hilber pergalek tampon a lîzê ya yekta bikar tîne da ku zû RNA ji nimûneyên hucreyên çandî ji bo reaksiyonên RT-qPCR azad bike, pêvajoya paqijkirina RNA ya demxwer û kedkar ji holê rabike, û tenê 7 hûrdem ji bo bidestxistina şablona RNA ya hewce, bi 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ku ji hêla kit PCR ve hatî peyda kirin zû û bi bandor dikare encamên rastîn û bi bandor bi dest bixe.

5× Direct RT Mix û 2× Direct qPCR Mix-Taqman xwedan tolerasyona înhîbîtor a bihêz in û dikarin bi karanîna lîzata nimûneya ku wekî şablonek were pîvandin vegerandin û zêdekirina taybetî pêk bînin.Di reagentê de Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl heye.₂, Tampona Reaksiyonê, PCR Optimizer û Stabilizer, ku dikare bi tampona lîzê re were bikar anîn da ku zû û bi hêsanî nimûneyan tespît bike, û xwedan taybetmendiyên hestiyar, taybetmendî û aramiyê ye.

taybetmendiyên Product

Teknolojiya Cell Direct RT ya hêsan û bandorker ku ji bo bidestxistina nimûneyên RNA bi qasî 7 hûrdeman digire.

Pêdiviyên nimûne piçûk in, û herî kêm 10 hucreyên çandî dikarin ji bo ceribandinê werin bikar anîn.

Rêbaza bilind ji bo bidestxistina bilez a RNA ya hucreyên çandî yên wekî 384, 96, 24, 12, û plakên 6-kanî.

Eraser DNA dikare zû genomên serbest rakirin, bandorê li ser encamên ceribandinê yên paşîn pir kêm bike.

Pergalên RT û qPCR yên optimîzekirî RT-PCR-ya du-gavekî bi veguheztina berevajî, taybetmendî, û tolerasyona berteka reaksiyonê ya RT-qPCR-ya bihêztir çalak dike.

sepanê Kit

Qada serîlêdanê: Hucreyên çandî.

Nimûneya lîza RNA ya şirovekirî: tenê wekî şablonek RT-qPCR ya du gav tê bikar anîn.

Kîtan dikarin ji bo mebestên jêrîn werin bikar anîn: Analîzkirina vegotina birêkûpêk a genê, ceribandina alel, vekolîna dermanan, hwd.

sînorên Kit

Parçeyên zêdekirî ≤ 300 bp.

Kîtan ji bo şaneyên nû yên çandî têne bikar anîn.

Kontrola kalîteya hilberê

Li gorî Pergala Rêvebiriya Qalîteya Tevahiya FOREGENE, her komek kîtên rêzikên Cell Direct RT-qPCR gelek caran bi tundî têne ceribandin da ku pêbawerî û aramiya kalîteya her komek kîtan misoger bike.

naveroka kit

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman dikare ji hev veqetandî were kirîn, hûrgulî di Pêvek 1 (RÛpel 13) de têne peyda kirin.

Şertên hilanînê

1. Şertên Shipping

Tevahiya pêvajoya veguheztina qutiya pakêta berfê ya germahiya nizm, da ku pê ewle bibe ku kît di rewşa <4 °C de ye.

2. Şertên hilanînê

Parçeya I li 4°C û Beş II di -20°C de hilînin.

Pêdivî ye ku Foregene Protease Plus II li 4°C were hilanîn, ne ku di -20°C de were cemidandin.

Reagent 2× Direct qPCR Mix-Taqman di -20°C de, an jî li 4°C ji bo karanîna demek kurt heke pir caran were bikar anîn (di nav 10 rojan de) tê hilanîn.

Agahdariya pêkhateya Kit

Tampon CL: Jîngeha ku ji bo reaksiyonên lîza hucreyê hewce dike peyda dike.

Tampon ST: Madeya çalak a di lîzatê de bi dawî dike da ku ji bandorên li ser RT-ya paşîn dûr bixe.

Eraser DNA: Rakera DNA, bandora rakirina genomê li ser ceribandinên paşerojê.

5× Têkeliya RT-ya rasterast: Ji bo lihevhatina herî baş a hevrêziya RNA ya Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, stabîlker, zêdeker, optimîzator, û primerên veguheztina berevajî vedihewîne (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Primer).

Foregene Protease Plus II: Di çarçoweya tampon lîzê de, hucre têne lîz kirin da ku asîdên nukleîk serbest berdin.

2× Direct qPCR Mix-Taqman: Ev reagent dihewîne Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl.₂, tampon reaksiyonê, optimîzatorê PCR, û stabîlîzker.

20× ROX Reference Dye: Bi gelemperî li ser amûrên zêdekirina PCR-ya Real Time-ê yên ABI, Stratagene û pargîdaniyên din têne bikar anîn, ew ji bo verastkirina cûdahiya di navbera lûleyên PCR û lûleyên ku ji ber xeletiyên dozkirina PCR-ê têne çêkirin têne bikar anîn.Pîvana 20 × ROX Reference Dye ku ji bo amûrên cihêreng hewce dike cûda ye, û bikarhêner dikare li gorî pîvana pêşniyarê ya amûrê lê zêde bike.

RNase-Bê ddH₂O: Ava ultra paqij a sterilkirî ya bê RNase ji bo reaksiyonên RT-qPCR du-gavek.

Tewdîr:(Bê guman berî ku kîtê bikar bînin tedbîran bi baldarî bixwînin)

Bala xwe bidin rêbaza xebitandinê ya ceribandinê da ku di navbera nimûneyan de ji gemarîbûnê dûr nekevin.

Bala xwe bidin paqijiya hawîrdora ceribandinê û amûran da ku ji qirêjiya RNase û hilweşandina RNA dûr bisekinin.

Nimûneyên hucreyê yên teze an baş-parastî bistînin û qet nimûneyên şaneyên cemidî-germkirî yên dubare bikar neynin.

5× Direct qPCR Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman divê ji dubarekirina cemidî-germkirinê dûr bikeve, wekî din ew ê bandorê li ser veguheztina berevajî û kargêriya PCR bike.

Preparationsberîemelî

Berî ku hûn vê kîtê bikar bînin, pê ewle bin ku hûn rêwerzanan bi baldarî bixwînin.Kiteya Cell Direct RT-qPCR hêsan, hêsan û bilez e ku kar dike, û rêwerzan agahdariya bêkêmasî li ser tevahî kîtê û çawaniya karanîna wê rast peyda dike.Ji kerema xwe berî karanîna materyal û amûrên ceribandinê yên pêwîst amade bikin.

Materyal û amûrên ezmûnî

◆ Hucreyên çandê.

◆ 1,5 ml an 2 ml, lûleya sentrîfujê ya RNase-/Bê-DNase, Tîpa bê RNase-/DNase, lûleya qPCR ya sterîl 0,2 ml.

◆ makîneya qPCR, pipet, santrîfujeya masê (≥13,400×g) (li gorî hewcedariyên ceribandinê ve girêdayî ye), hwd.

Ewlekarî

◆ Ev hilber tenê ji bo armancên lêkolîna zanistî ye, ji kerema xwe wê ji bo armancên derman, klînîkî, xwarin û kozmetîkî bikar neynin.

◆ Dema ku madeyên kîmyewî bikar tînin, kincên laboratûvarê yên guncan, destik, camên parastinê, hwd.

Emelîrêberên

Pergalên Lysisa Hucreyê, pergalên RT, û pakêtên lêzêdekirina çareseriya reaksiyonê qPCR dikarin ji hev cuda werin kirîn, ji bo hûrguliyên di Pêvek 1 de (RÛpel 13).

Rêbernameya operasyonê

A: Nimûneya serbestberdana RNA

1. Şane berî hatin dermankirin: Plakaya çanda şaneyê bi PBS sar bişon, dûv re şaneyan lîz bikin (10-10⁶), 10⁶ ji mîqdara şaneyan, ji bo derxistin û paqijkirina RNA-yê Foregene Hucre an Kîta Veqetandinê ya RNA Tev (DE-03111) an Kita Tevahiya RNA ya Heywanê (DE-03011) tê pêşniyar kirin.

1.1.Hucreyên pêgirtî (wek mînak plakaya 24-kaniyê)

1.1.1.Di her bîrekê de hejmara şaneyan diyar bikin, diyar bikin ku hejmara şaneyan 1 × 10 e⁵, û pipetek bikar bînin da ku navgîniya çandê ji firaxê çandê derxînin.

1.1.2.Li her bîrekê 200 μl 1 × PBS ya berî-sarkirî lê zêde bikin.Dubare pîpetê nekin û PBS ji bîran derxînin.Plateyê bizivirînin û bi qasî ku gengaz dibe PBS jê bikin.Biçe gava 2.

1.1.3.Cûreya çanda hucreyê an tabloya jimareya referansê 1-1 di firaqek çanda hucreyê de ji bo şuştina hucreyê 1 × PBS berî sarkirî hate zêdekirin.

Tablo 1-1: Doza PBS ji bo hejmarên cûda yên hucreyan

Not：Ji bo ku hucreyên pêgirtî yên zexm peyda bikin,Di dema şuştinê de hejmareke mezin ji windabûna hucreyê dûr dikeve.

1.2.Hucreyên suspension an şaneyên pêvekirî yên ku di pelên ne-poroz de têne çandin

1.2.1.Şaneyên pêvekirî yên ku di lewheyên ne-pir-kaniyê de têne çandin (şaneyên suspensionê ji gava paşîn 1.2.2 dest pê dikin), şaneyan li gorî şêwaza berhevkirina şaneya normal berhev dikin û ji hev vediqetînin, û wan bixin nav plakaya çandê an lûleya santrîfujê;ger trîpsînîzasyon were bikar anîn, ji bo komkirina şaneyan û ji bo rakirina mayî ya trîpsînê santrîfujasyon hewce dike, şaneyên ji nû ve veqetandî yên PBS li hucreyên takekesî hatine zêdekirin da ku şaneyan belav bikin.

1.2.2.Piştî ku hejmara şaneyan hatin jimartin, şaneyên 1×10 dabeş kirin⁵ yek ji bo lûleyên santrîfujê, şaneyan bi santrîfujasyonê li 1000 × g ji bo 10 min kom dikin.

1.2.3.200 μl PBS li lûleya santrîfujê zêde bikin, dûbare pîpetê nekin, û rasterast PBS-ê aspire bikin.ber bi gava 2-ê ve biçe. (Eger barkirin dijwar be û şaneyên ji nû ve hatin sekinandin, dikare 1000×g santrîfujkirî 10 hûrdem piştî avêtina supernatant were kirin, peleta şaneyê ber bi gava 2 ve diçe)

2.Lîza şaneyê: Tampon CL rakin, germahiya wê bi germahiya odeyê re hevseng, DNA Eraser û Foregene Protease Plus II, li gorî tabloya jêrîn 1-2 pergala lîzê ya amadekirî derxînin: (Çareseriya Lysis ji bo karanîna amade ye).

Tablo 1-2: perçebûn amadekirina pergalê (Têbînî: di amadekirina li ser berfê de)

3.( 24-plaqa wek mînak) 200 μl ji mixa sereke ya lîza hucreyê bi pîpetê bixin nav her bîrekê, 5-10 caran dubare bifirînin, 5 hûrdeman li germahiya odeyê (20-25 ℃) bihêlin.

Not：Ji bo ku ji çêbûna bilbilan dûr bikevin, ji kerema xwe dema ku pîvana pipetê bi 200 μl an kêmtir hate verast kirin.Dibe ku hucre piştî lîzê ewr xuya bibin, ku ev normal e.

4.(24 -plateka wek mînak) di şilavê de 20 μl Buffer ST tê zêdekirin (pergalên lîzkirinê yên cihêreng Buffer ST bi mîqdara ku di Tabloya 1-3 de tê xuyang kirin) hatî zêdekirin, 5-10 caran pîpkirin tê dubare kirin, li germahiya odeyê (20-25 ℃) 2 hûrdem hatin înkubakirin.

Not：Tîpa pîpetê li binê rûyê erdê davêje, piştrast dike ku lysate lê zêde bûye,ji bo ku ji pêkhatina bilbilan dûr bikevin, ji kerema xwe dema ku pîvana pipettê bi 200μl an kêmtir hate verast kirin.

Tabloya 1-3：Buffer ST zêde bikin

5.The lysate ji bo ceribandinên paşîn ên RT-qPCR tê bikaranîn.Ger ceribandinên paşîn di wextê xwe de nekarin bêne kirin, ji kerema xwe wê 2 demjimêran zêdetir li ser cemedê bihêlin, û li -20℃ an -80 ℃ (ji sê mehan bêtir) hilînin.

B: Amadekirina pergala RT

1. 5 × Direct RT Mix derxînin û li ser hemamek qeşayê bihêlin, bihêlin ku bi rengek xwezayî bihele, û ji bo karanîna paşê bi nermî tevlihev bikin;ddH2O-ya Bê-RNase derxin û bihelînin û bidin ser hemamek qeşayê ku paşê bikar bînin.Li gorî Tabloya 2-1 a li jêr pergala reaksiyonê li ser cemedê amade bikin.

Tablo 2-1: Amadekirina pergala berteka RT

2.Piştî qedandina formulasyona pergalê, di tabloya jêrîn de bi nermî tê tevlihev kirin û bi kurtî santrîfuj kirin 2 -2 şert û mercên reaksiyonê reaksiyona RT.

Tablo 2-2: Mîhengkirina rewşa Reaksiyona RT

3.Piştî qedandina reaksiyonê, hilbera reaksiyonê rasterast ji bo qPCR li ser berfê hate danîn, ji kerema xwe parastina demdirêj -20℃ an -80 ℃ danîn.

Nîşe: Ji ber karanîna şablonê ne-paqijkirî, dibe ku barên spî di hilbera veguheztina berevajî de xuya bibin.Ev fenomenek normal e.Ji bo ceribandinên paşîn tavilê supernatant santrîfuj bikin.

Çareseriya reaksiyonê ya RT ya ku di encamê de tê zêdekirin li pergalên reaksiyonê yên PCR-ya Step Real Time-ê ya paşîn tê zêdekirin, tê pêşniyar kirin ku mîqdarên di navbera 10-30% pergala reaksiyonê de zêde bikin.

C: Amadekirina pergala reaksiyonê ya qPCR

1.Hejmarek guncaw a B di qalibê cDNA yê gavê de li gorî tabloya jêrîn 3-1 hatî amadekirin ji bo amadekirina pergalek reaksiyonê.

Nîşe: Hejmara şablonê cDNA %10-30 ya pergala qPCR pêk tîne.Mînakî, di pergalek qPCR ya 20 μl de, 2-6 μl tampona lîzê lê zêde bike, lê ne ji 6 μl.

2. Ji bo reaksiyona qPCR şert û mercên baş ên başkirina qPCR (Germahiya annealkirinê, hwd.) (Şertên reaksiyonê yên li Tabloya 3-2 hatine dayîn).

Nîşe: Biceribînin ku ji bo reaksiyonên qPCR şertên xweşbîn bikar bînin da ku encamên çêtir bistînin.

Tablo 3-1: Amadekirina pergala berteka PCR

1*: Dema ku performansa reaksiyonê ya primer nebaş be dikare di navbera 50-900 nM de were sererast kirin.

Nîşe: Pergala qPCR dikare li gorî hewcedariyên ezmûnî û modela cycler fluorescence were sererast kirin.Ji bo qPCR di 50 deμPergala l-ê, li gorî 20-ê bi rêkûpêk dozaja reagentê rast bikinμl sîstema.

2*: Li gorî çerxa germî ya mîqdar a fluorescence ya ROX Reference Dye pîvaza paşîn a guncan hilbijêrin.Girêdanên herî maqûl ên ROX Reference Dye ji bo çîkalên mîqdar ên fluorescence yên hevpar di tabloya jêrîn de têne destnîşan kirin:

Tablo 3-2: Şertên reaksiyona qPCR têne peyda kirin

Nîşe: Ji bo bidestxistina bandora qPCR ya çêtirîn, gradient PCR dikare were bikar anîn da ku şert û mercên reaksiyonê ji bo şablonên cihêreng û primerên cihêreng xweş bike.Şert û mercên reaksiyona PCR-ê li gorî analyzera floransê, şablon, primerê, hwd diguhere. Di operasyona taybetî de, şertên reaksiyonê yên herî baş hewce ne ku li gorî şert û mercên taybetî yên çerxa germî ya pîjdar a floransansê, celebê şablonê, mezinahiya perçeya balkêş, rêza bingehê ya perçeya zêdekirî û naveroka GC û dirêjahiya germahiya reaksiyonê, di nav de dema reaksiyonê, hwd.

Prensîbên sêwirana primera PCR-ya Real Time

Pêşî Primer û Reverse Primer

Ji bo Real Time PCR, sêwirana primer pir girîng e.Primer bi taybetmendî û karbidestiya zêdekirina PCR-ê ve girêdayî ne, û dikarin li gorî prensîbên jêrîn werin sêwirandin:

◆ Dirêjahiya Primer: 18-30bp.

◆ Naveroka GC: 40-60%.

◆ Nirxa Tm: Nermalava sêwirana Primer, wekî Primer 5, dikare nirxa Tm ya aşîtê bide.Nirxên Tm yên primerên jorîn û jêrîn divê bi qasî ku pêkan nêzîk bin.Formula hesabkirina Tm jî dikare were bikar anîn: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Dema ku PCR tête kirin, germahiyek li jêr nirxa Tm ya primer a 5 °C bi gelemperî wekî germahiya paqijkirinê tê hilbijartin (zêdebûna têkildar a germahiya paqijkirinê dikare taybetmendiya reaksiyona PCR zêde bike).

◆ Primer û hilberên PCR:

◆ Dirêjahiya hilbera zêdekirina PCR-a sêwirana primer bi tercîh 100-150 bp e.

◆ Divê primerên sêwiranê yên li qada avahîsaziya duyemîn a şablonê bi qasî ku gengaz were dûr kirin.

◆ Ji avakirina 2 an jî zêdetir bingehên temamker di navbera 3' dawîn a primerên jorîn û jêrîn de dûr bixin.

◆ Bingeha termînalê ya Primer 3' nikare bi 3 G an C yên li pey hev re hebe.

◆ Pîmer bi xwe nikarin xwedan strukturên temamker bin, wekî din dê avahiyek porê çêbibe, ku bandorê li zêdekirina PCR bike.

◆ Pêdivî ye ku ATCG di rêza pêşîn de bi qasî ku mimkun dibe yeksan were belavkirin, û bingeha termînalê ya 3' divê wekî T ​​were dûr kirin.

Pêvok1：Cell DirectRT-qPCR Kit component pakêta lêzêdekirina

1.Cell Lysis Çareseriya