Kîta îzolasyonê ya DNA-ya Bûkal / Karta FTA-yê Ji Swabên Buccal Derxistina an Paqijkirina DNA ya Genomîk
Kit Description:
Zû ADN-ya genomîkî ya kalîteya bilind ji nimûneyên swaba buccal / Karta FTA paqij bikin.
◮No gemarî RNase:Stûna tenê ya DNA-ya ku ji hêla kîtê ve hatî peyda kirin dihêle ku bêyî zêdekirina RNase di dema ceribandinê de RNA ji DNA-ya genomîk were derxistin, û rê li ber gemarîbûna laboratûvarê ji hêla RNase-a eksogenous ve bigire.
◮Leza bilez:Foregene Protease ji proteazên mîna wan çalakiyek bilindtir e, û nimûneyên tevnvîsê zû dihelîne;Operasyon hêsan e, û operasyona derxistina DNA ya genomîk dikare di nav 20-80 hûrdeman de were qedandin.
◮Erzan:Santîfûgasyon li germahiya odeyê tê kirin, û ne hewce ye ku 4 °C santrîfujasyonek germahiya nizm an barîna etanolê ya DNAyê.
◮Ewlekarî:Ne derxistina reagenta organîk hewce ye.
◮Kalîteya bilind:ADNya genomîk a hatî derxistin xwedan perçeyên mezin, bê RNA, bê RNase, û naveroka îyonek pir kêm e, ku dikare hewcedariyên ceribandinên cihêreng bicîh bîne.
◮Sîstema mîkro-elution:Ew dikare giraniya DNA-ya genomîk zêde bike, ku ji bo tespîtkirin an ceribandina jêrîn hêsan e.
Terîf
Ev kît rêgezek bikêr û bilez peyda dike da ku DNA-ya genomîkî ya bi konsantasyona bilind ji şûşeyên bukal û Karta FTA (lûkên xwînê) werbigire.Karanîna şirketa me'Stûn û formula spinê ya membrana silîka-tenê DNA-ya yekta, ku bi Foregene Protease re tête hev kirin, DNA-ya genomîkî ya bi konsantresyona bilind û bi kalîte dikare di 80 hûrdeman de were derxistin.Stûna paqijkirina piçûk a ku bi taybetî hatî sêwirandin DNA-ya genomîk girêdide, û DNA dikare bi mîqdarek piçûk were şuştin (15μl) pergala helandinê ji bo zêdekirina giraniya ADNya genomîkî ya hatî bidestxistin, ku ji bo vedîtin an ceribandina jêrîn hêsan e.Kit dikare yek an çend nimûneyan di yek carê de pêvajoyê bike, û pêvajoya paqijkirinê hewce nake ku maddeyên organîk ên wekî fenol, kloroform, û barîna isopropanol an etanolê ku dem dixwe, û operasyon sade û dem-teser e.
Specifications
50 Amadekirin
pêkhateyên Kit
| Tampon ST1 |
| Tampon ST2 |
| Linear Acrylamide |
| Tampon PW |
| Tampon WB |
| Tampon EB |
| Foregene Protease |
| DNA-Tenê Stûn |
| Instructions |
Taybetmendî & avantajên
-Bêgirbûna RNase: Stûna tenê ya DNA-yê ku ji hêla kîtê ve hatî peyda kirin gengaz dike ku bêyî zêdekirina RNase di dema ceribandinê de RNA ji DNA-ya genomîk were derxistin, ji ber ku laboratûwar ji hêla RNase-a eksogenous ve neqeliqî.
-Lezbûna bilez: Foregene Protease ji proteazên mîna wan çalakiyek bilindtir e, nimûneyan zû diherike;operasyona hêsan.
-Kêmasî: Nantrîfûjasyon li germahiya odeyê tê kirin, û ne hewce ye ku 4°C santrîfujasyonek germahiya nizm an barandina etanolê ya DNAyê.
-Ewlehî: Ne derxistina reagenta organîk hewce ye.
-Qalîteya bilind: ADNya genomîkî ya hatî derxistin perçeyên mezin, bê RNA, bê RNase, û naveroka îyonê ya pir kêm e, ku dikare hewcedariyên ceribandinên cihêreng bicîh bîne.
-Pergala mîkro-hilweşînê: Ew dikare hûrbûna DNA-ya genomîk zêde bike, ku ji bo vedîtin an ceribandina jêrîn hêsan e.
sepanê Kit
Ew ji bo paqijkirina DNA-ya genomîk ji nimûneyên jêrîn maqûl e: şûvên bukal, Karta FTA (rengên xwînê).
Storage û Refê jiyana
-Ev kît dikare 12 mehan di bin şert û mercên hişk de li germahiya odeyê (15-25°C) were hilanîn;heke hewce bike ku demek dirêjtir were hilanîn, dikare di 2-8 °C de were hilanîn.
Nîşe: Ger di germahiya nizm de were hilanîn, çareserî ber bi baranê ve dibe.Berî ku bikar bînin, bisekinin ku çareseriyek di kîtê de ji bo demekê li germahiya odeyê bi cîh bikin.Ger hewce be, wê di hemamek avê ya 37°C de ji bo 10 hûrdeman germ bikin da ku barhilat bihelin, û berî bikar bînin tevlihev bikin.
-Çareseriya Foregene Protease xwedan formula yekta ye, ku dema ku ji bo demek dirêj (3 meh) li germahiya odeyê tê hilanîn çalak e;çalakî û îstîqrara wê dema ku li 4°C were hilanîn çêtir dibe, ji ber vê yekê tê pêşniyar kirin ku ew di 4°C de were hilanîn, ji bîr mekin ku ew di -20°C de nehêlin.
Stûna paqijkirinê xitimî ye
Di vê kîtê de, di operasyona derxistina DNA ya genomîk de, stûna paqijkirinê rasterast li ser tevlêbûna lîza enzîmatîk a nimûneyê bêyî gavavêtina santrîfugê tê vegirtin, û stûna paqijkirinê dibe ku ji ber enzîmkirina bêkêmasî û vîskozîteya bilind a nimûneyê were asteng kirin.
Sedemên gengaz ên jêrîn ev in:
1. Netemamkirina enzîma ya nimûneyên tevnê.
Pêşniyar: Dema hilberandina nimûneyê ya Foregene Protease dikare bi guncan were dirêj kirin an jî supernatant dikare piştî santrîfugêkirinê di 12,000 rpm (~ 13,400 × g) ji bo 5 hûrdeman were girtin.
2. Bikaranîna zêde ya nimûneyên tevnvîsê an jî tevnên mezin.
Pêşniyar: Çêtir e ku di nimûneyê de 1 swab Buccal derbas nebe;heke nimûne pir mezin be, li gorî vê dosyaya Buffer ST1, Foregene Protease, tampon ST2 zêde bikin.
3. Vîskozîteya nimûneyê pir zêde ye.
Pêşniyar: Nimûn dikarin bi guncan bi 10 mM Tris-HCl berî derxistina ADN-ya genomîk werin rijandin.
4. Parçeyên karta xwînê hatine mêjkirin.
Pêşniyar: Dema santrîfujasyonê ya demkî ya gava 6-ê ya derxistina genomîkî ya xala xwînê (Kerta FTA) dikare bi guncan were dirêj kirin.
Hilberîna kêm an tunebûna DNA
Bi gelemperî cûrbecûr faktor hene ku bandorê li hilberîna DNA ya genomî dikin, di nav de eslê nimûneyê, şertên hilanîna nimûneyê, amadekirina nimûneyê, manipulasyon, hwd.
Di dema derxistinê de ADNya genomî nayê bidestxistin
Sedemên gengaz wiha ne:
1. Parastina nerast a nimûneyan an hilanînê ji bo pir dirêj dibe sedema hilweşîna DNA ya genomîk.
Pêşniyar: Divê şûşeyên devkî yên devkî ji nû ve bên ceribandin, û nayê şîret kirin ku ji bo operesyonên derxistina DNA-ya genomîk şûşeyên parastî bikar bînin;Nimûneyên deqên xwînê divê piştrast bikin ku kalîte jêhatî ye û dema hilanînê divê pir dirêj nebe.
2. Bikaranîna pir hindik tevnê dibe ku bibe sedema nederxistina DNAya genomîk a têkildar.
Pêşniyar: Di rêbernameya operasyonê de rêwerzên nimûneyên şûşeya bukalê bişopînin, û bi qasî ku gengaz dibe bişoxilînin da ku ji bo derxistina DNA ya genomîk bi têra xwe şaneyên bi sûpa devkî ve werin girêdan;ji bo derxistina nimûneya lekeya xwînê, qada birrîna lekeya xwînê bi guncan dikare were zêde kirin.
3. Foregene Protease bi neheqî tê parastin, di encamê de çalakiya wê kêm dibe an neçalak dibe.
Pêşniyar: Mercên hilanînê yên Foregene Protease piştrast bikin an ji bo reaksiyona enzîmatîk wê bi Foregene Protease nû veguherînin.
4. Parastina nerast ya kîtê an dema hilanînê pir dirêj e, di encamê de hin pêkhateyên di kîtê de têk diçin.
Pêşniyar: Ji bo prosedurên têkildar kîtek nû ya veqetandina DNA ya swab Buccal bikirin.
5. Tampon WB etanolê mutleq lê zêde nake.
Pêşniyar: Piştrast bikin ku tampon WB hêjmara rast a etanolê mutleq zêde dike.
6. Eluent bi awayekî rast li fîlma silicone nayê zêdekirin.
Pêşniyar: Dilopên eluentê yên berî-germkirî yên 65 °C li nîvê parzûna silîkonê zêde bikin û 5 hûrdeman li germahiya odeyê bihêlin da ku karbidestiya helandinê zêde bikin.
ADNya genomîkî ya kêm-hilberî hate veqetandin
Sedemên gengaz ên jêrîn ev in:
1. Parastina nerast a nimûneyan an hilanînê ji bo pir dirêj dibe sedema hilweşîna DNA ya genomîk.
Pêşniyar: Çûçikên devkî bi tercîhî numûneyên nû têne kirin, û şûşeyên parastî divê ji bo derxistina DNA-ya genomîkî neyên bikar anîn.
2. Ger mîqdara nimûneya tevnê pir hindik be, dê naveroka DNA ya genomîkî ya hatî derxistin kêmtir be.
Pêşniyar: Talîmatên nimûneya şûşeya devkî ya di rêbernameya xebitandinê de bişopînin, bi qasî ku gengaz be paqij bikin da ku ji bo derxistina DNA-ya genomîk bi qasî şaneyan bi sûpa devkî ve were girêdan.
3. Foregene Protease bi neheqî tê parastin, di encamê de çalakiya wê kêm dibe an neçalak dibe.
Pêşniyar: Mercên hilanînê yên Foregene Protease piştrast bikin an ji bo reaksiyona enzîmatîk wê bi Foregene Protease nû veguherînin.
4. Pirsgirêkên eluent.
Pêşniyar: Ji bo elutionê Buffer EB bikar bînin;heke ddH bikar bînin2O an eluentên din, piştrast bikin ku pH ya eluate di navbera 7.0-8.5 de ye.
5. Eluate bi dilopek rast nayê zêdekirin.
Pêşniyar: Dilopên eluentê li nîvê parzûna silîkonê zêde bikin û 5 hûrdeman li germahiya odeyê bihêlin da ku kargêriya elûkirinê zêde bikin.
6. Şîva helandinê pir hindik kom dibe.
Pêşniyar: Ji bo elusyona DNA ya genomîk wekî ku di rêwerzan de tê xwestin, eluent bikar bînin, qet nebe ji 15 μl.
Paqijiya kêm a ADNya genomîk veqetandî
Paqijiya DNA ya genomîkî ya kêm dikare bibe sedema têkçûn an encamên nerazî yên ceribandinên jêrîn, wek: enzîm nayên vekirin, PCR nikare perçeya genê ya balkêş bigire, hwd.
Sedemên gengaz wiha ne:
1. Qirêjiya heteroproteîn, qirêjiya ARN.
Analîz: Stûna paqijkirinê bi karanîna Buffer PW nehat şûştin;stûna paqijkirina şuştina Buffer PW bi karanîna leza navendî ya rast nehat şûştin.
Pêşniyar: Berî ku etanolê lê zêde bikin, pê ewle bin ku di rûbera zêde de baran nebe;Bawer bikin ku stûna paqijkirinê li gorî rêwerzan bişon, û ev gav nayê avêtin.
2. qirêjiya îyonê nepaqijî.
Analîz: Stûna paqijkirina şuştina WB ya tampon tenê carekê hate şûştin an jî hate şuştin, û di encamê de gemariya îyonî ya mayî derket.
Pêşniyar: Bawer bikin ku Buffer WB 2 caran li gorî rêwerzan bişon da ku îyonên bermayî bi qasî ku pêkan were rakirin.
3. Kêmbûna enzîma RNA.
Analîz: RNên biyanî li tamponê hatin zêdekirin;Operasyona şuştina PW ya tampon xelet bû, di encamê de bermahiyên RNase, bandor li operasyonên ceribandina RNA-ya jêrîn, wek transkrîpsiyona in vitro kir.
Pêşniyar: Kîtên îzolekirinê yên asîda nukleîk ên rêza Foregene dikarin RNA-yê bêyî zêdekirina RNase derxînin, ji ber vê yekê Kîta îzolasyonê ya DNA-ya qerta FTA-ya bucalê hewce nake ku RNase lê zêde bike;Jê bawer bin ku rêwerzên stûna paqijkirina şuştina Buffer PW bişopînin, û ev gav nayê avêtin.
4. Bermayiya Etanol.
Analîz: Tampon WB piştî şûştina stûna paqijkirinê santrîfujasyona lûleya vala pêk neanî.
Pêşniyar: Li gorî rêwerzan operasyona santrîfujasyona lûleya vala ya rast bikin.
5. Din qirêjiya nepakî.
Analîz: Nimûneyên hilanîn an nimûneyên taybetî pêşî nayên derman kirin.
Pêşniyar: Mînakê li gorî ku hatî destnîşan kirin bi tevahî pêşde bikin.
