Escherichia Coli O157: Kîta Tespîtkirina Asîda Nukleîk H7 (Rêbaza sondaya fluorescent a PCR/Lyofîlîzasyon)
Kit Description:
Pisîk.No.FP103
Ew ji bo tespîtkirin û vekolîna bilez a E. coli O157: H7 di nimûneyên xwarin, xwarin, av û nimûneyên hawîrdorê de tê bikar anîn.
Danasîn
Ji bo tê bikaranînTespîtkirin û vekolîna bilez a E. coli O157:H7 di nimûneyên xwarin, xwarin, av û nimûneyên hawîrdorê de.
[prensîba ceribandinê]
Li gorî prensîba teknolojiya fluorescent PCR, primerên taybetî û sondajên Taqman ji bo gena taybetî ya Escherichia coli O157: H7 têne sêwirandin, û ji hêla amûrek PCR-ya fluorescent ve têne vedîtin, da ku têgihîştina Escherichia coli O157: H7 Tespîtkirina kalîte ya ADNyê pêk were.
Naveroka Kit
Nîşe: Lêpirsîna kanala ROX ne tê de ye.
| Cpêkhateyên | Specification | Qunantity |
| Tampon A | Lûle | 1 |
| Tampon B | Lûle | 1 |
| Kontrola erênî | Lûle | 1 |
| Kontrola neyînî | Lûle | 1 |
Bikaranîna Hêvî
Ji bo tê bikaranîn Tespîtkirin û vekolîna bilez a E. coli O157:H7 di nimûneyên xwarin, xwarin, av û nimûneyên hawîrdorê de.
Mercên hilanînê Û Dîroka Dawîbûnê
Di tariyê de di -20℃ de hilînin û ji dûbare cemidandin û helandinê dûr bixin.
Dema derbasbûnê 12 emeh, û tarîxa hilberînê li ser pakêta derve tê xuyang kirin.
Amûrên Û Vexwarinê
Amûra PCR-ya mîqdar a fluorescent, çeka pîpetê û serişteyên lihevhatî, hejkera vortex, santrîfujek piçûk.
Bikaranîna
1. Sample Processing
1.1 Tîpa Nimûneyê: Ev kît ji bo xwarin, xwarin, nimûneyên avê û nimûneyên din ên ku guman tê kirin ku ji hêla Escherichia coli O157:H7 ve têne qirêj kirin, maqûl e.Ji bo hilberên goşt, vexwarin û maddeyên din ên ku pigmentan di nav xwe de têne hilberandin kûr, pêdivî ye ku ew werin şuştin da ku bandorê li berhevoka sînyala floransê neke.
1.2 Pêvajoya Nimûneyê: Ji bo amadekirina nimûneyê, çanda dewlemendkirinê û veqetandina Escherichia coli O157: H7, ji "GB 4789.10-2016 Ewlehiya Xwarinê Vekolîna Mîkrobiyolojîk a Xwarinê ya Neteweyî ya Standardî ya Escherichia coli O157: Test H7" binihêrin.
- Nderxistina asîda ucleic
20 mL çareseriya zengînkirinê di lûleya santrîfujê ya 1,5 mL de hilînin, 200 μL lîzata mîkrobial lê zêde bikin (pêdivî ye kîtek zêde), 30 çirkeyan dorvekin, bi kurtî santrîfuj bikin û bidin aliyekî.
Têbînî: Derxistina asîda nukleîk ji lîzatê divê di nav 10 hûrdeman de biqede, û ji bo demek dirêj nayê hilanîn.
3. Zêdekirina Asîda Nukleîk
3.1 Ji bo karanînê amûra PCR-ya mîqdar a florescentê vekin.
Buffer A û Buffer B ji kîtê, wan bi tevahî bihelînin, û bi kurtî santrîfuj bikin.18 μL Buffer A û 2 μL Buffer B li her lûleya reaksiyonê ya PCR zêde bikin.Dûv re 5 mL her yek ji kontrolên neyînî, asîda nukleîk a jêderkirî, û kontrola erênî li lûleyên reaksiyona PCR zêde bikin, lûleyan bipêçin, û bi kurtî santrîfuj bikin.
3.3 Tîpa reaksiyonê ya PCR veguherînin makîneyek PCR-ya fluorescent, û prosedurên jêrîn bikar bînin da ku ceribandinên amplifikasyonê pêk bînin: 25 ml ji bo pergala reaksiyonê hilbijêrin, ji bo her çerxê îşaretên floransê li 60°C kom bikin, û ji bo kanala tespîtê FAM hilbijêrin.
| Gav | Bername | Hejmara çerxên |
| 1 | 37℃ 5min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (floransence komkirin) |
Rêbernameyên ji bo analîzkirina pirsgirêkan
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
ARN nayê derxistin an jî hilberîna asîda nukleîk kêm e
Bi gelemperî gelek faktor hene ku bandorê li kargêriya hilanînê dikin, wek mînak: naveroka RNA-yê nimûne, rêbaza xebitandinê, qebareya hilanînê, hwd.
Analîza sedemên hevpar:
1.Heşma cemedê an santrîfujkirina germahiya nizm (4 ° C) di dema xebatê de.
Pêşniyar: Germahiya odeyê (15-25 ° C) xebitandin, qet hemamê qeşayê û santrîfuja germahiya nizm.
2. Hilberîna nimûne ya nerast an hilanîna nimûne ji bo pir dirêj.
Pêşniyar: Nimûneyên di -80 ° C de hilînin an di nîtrojena şil de bicemidînin, û ji karanîna dubare ya cemidî-germkirinê dûr bixin;hewl bidin ku nimûneyên nû yên berhevkirî ji bo derxistina RNA bikar bînin.
3.Lîza nimûneyê ne bes
Pêşniyar: Ji kerema xwe piştrast bikin ku nimûne û çareseriya xebatê (Acrylamide Linear) bi tevahî tevlihev bûne û ji bo 10 hûrdeman li germahiya odeyê (15-25 ° C) hatine inkub kirin.
4.Eluent bi xeletî hate zêdekirin
Pêşniyar: Piştrast bikin ku RNase-Free ddH2O li nîvê membrana stûna paqijkirinê were zêdekirin.
5.Improper volume of ethanol anhydrous di Buffer viRW2
Pêşniyar: Ji kerema xwe talîmatan bişopînin, hêjmara rast a etanolê bêhîd li Buffer viRW2 zêde bikin û berî ku kîtê bikar bînin wan baş tevlihev bikin.
6. Bikaranîna nimûneya neheq.
Pêşniyar: 200 μl nimûne ji 500 μl Buffer viRL.Hejmara zêde ya nimûneyê dê bibe sedema kêmbûna rêjeya derxistina RNA.
7.Hejma elutionê nebaş an jî elution netemam.
Pêşniyar: Hêjeya eluentê ya stûna paqijkirinê 30-50μl e;heke bandora helandinê ne têrker be, tê pêşniyar kirin ku ddH-ya RNase-Free ya berî-germkirî lê zêde bikin.2O û dema danîna li germahiya odeyê, wek 5-10 min, dirêj bikin
8.Stûna paqijkirinê piştî şuştina di Buffer viRW2 de bermayiya etanolê heye.
Pêşniyar: Ger etanol piştî şuştina di Buffer viRW2 û santîfujkirina lûleya vala 2 hûrdeman hîn bimîne, stûna paqijkirinê dikare 5 hûrdem li germahiya odeyê were hiştin piştî santrîfujkirina lûleya vala da ku etanola mayî bi tevahî were rakirin.
Hilweşîna molekulên RNA yên paqijkirî
Qalîteya RNA-ya paqijkirî bi faktorên wekî hilanîna nimûneyê, qirêjiya RNase, û xebitandinê ve girêdayî ye.
Analîza sedemên hevpar:
1.Nimûneyên hatine berhevkirin di wextê de nehatine rizgarkirin.
Pêşniyar: Ger nimûne piştî berhevkirinê di wextê xwe de neyê bikar anîn, ji kerema xwe wê tavilê li -80 ℃ an nîtrojena şil hilînin.Ji bo derxistina molekulên ARNyê, hewl bidin ku nimûneyên nû yên berhevkirî gava ku gengaz be bikar bînin.
2.Nimûneyên berhevkirî gelek caran dicemidin û dihelin.
Pêşniyar: Di dema berhevkirin û hilanînê de ji dubarekirin û cemidandinê (ji carekê zêdetir nebe) xwe dûr bigirin, wekî din dê hilberîna asîda nukleîk kêm bibe.
3.RNase di salona emeliyatê de hat kirin an jî destmal, maske û hwd.
Pêşniyar: Derxistina ceribandina molekulên ARNyê çêtirîn li jûreyek xebitandina RNA ya cihê tê kirin, û tabloya ceribandinê berî ceribandinê were paqij kirin.Di dema ceribandinê de destik û maskên yekcar li xwe bikin da ku ji hilweşîna RNA ya ku ji hêla danasîna RNase ve hatî çêkirin dûr bixin.
4.Reagent di dema karanîna de ji hêla RNase ve tê qirêj kirin.
Pêşniyar: Ji bo ceribandinên têkildar Kita Veqetandina RNA ya Vîrusê ya nû veguherînin.
5. Tevliheviya RNase ya lûleyên santrîfujê, tîpên pîpetan, hwd. Pêşniyar: Piştrast bikin ku lûleyên santrîfujê, lûleyên pîpetê û pîpetan tev bê RNase ne.
Molekulên RNA yên paqijkirî bandor li ceribandinên jêrîn kirin
Molekulên RNA yên ku ji hêla stûna paqijkirinê ve têne paqij kirin dê bandorê li ceribandinên jêrîn bikin heke pir îyon an proteînên xwê hebin, wek: veguheztina berevajî, Blot Bakur, hwd.
1.Di molekulên ARNyê yên helbûyî de îyonên xwê yên mayî hene.
Pêşniyar: Piştrast bikin ku hecmê rast ê etanola bêhîd li Buffer viRW2 hatiye zêdekirin, û stûna paqijkirinê du caran li gorî leza santrîfujasyonê ya rast a li ser rêwerzên xebitandinê bişon. Heke hîn îyonên xwê mane, hûn dikarin Buffer viRW2 li stûna paqijkirinê zêde bikin, û 5 hûrdeman li germahiya odeyê bihêlin.Dûv re santrîfûjasyonê bikin da ku gemariya îyonên xwê heya radeya herî mezin jêbirin
2.Di molekulên ARNyê yên helbûyî de etanolê mayî heye
Pêşniyar: Carekê piştrast kir ku stûnên paqijkirinê ji hêla Buffer viRW2 ve hatine şuştin, santrafîjasyona lûleya vala li gorî leza centrifûgal a li ser rêwerzên xebitandinê pêk bînin.Ger hîn etanolê mayî hebe, ew dikare 5 hûrdeman li germahiya odeyê were hiştin piştî santrîfujasyonek lûleke vala da ku etanola mayî herî zêde jê bibe.
Manuals Instruction:
Destûra Rêvebiriya Kîtê ya Îsolasyona RNA ya Viral
