Sterilîzasyona tîrêjên pipetê û tubên EP, hwd.
1. 0.1% (hezaran) DEPC (maddeya pir jehrî) bi ava deionîzekirî re amade bikin, bi baldarî di nav dûmanek de bi kar bînin û li 4°C dûrî ronahiyê hilînin;
Ava DEPC ava paqij e ku bi DEPC-ê tê derman kirin û ji hêla germahiya bilind û tansiyona bilind ve tê sterilîzekirin.Ceribandin ku ji RNase, DNase û proteinase bêpar be.
2. Tîpa pipetê û lûleya EP-ê têxin 0,1% DEPC, û piştrast bikin ku tîpa pipetê û lûleya EP-ê bi %0,1 DEP-ê dagirtî ne.
3. Ji ronahiyê biparêzin, bihêlin, di şevekê de (12-24h)
4. Qutiya ku tê de tîp û lûleya EP-ê tê de ne hewce ye ku di DEPC de were şil kirin.Piştî ku bi hûrgulî ava DEPC-ê di tîrêjê an lûleya EP-ê de derxistin, wê pak bikin û pêça.
5. 121 pileyên Celsius, 30min
6. 180 pileyên Celsius, çend demjimêran hişk bikin (kêmtirîn 3 saetan)
Nîşe: a.Dema ku bi DEPC-ê re mijûl dibin destek û maskên lateksê li xwe bikin!b, an bêyî sterilîzasyona DEPC, 130 ℃, 90 hûrdeman autoclave (gelek laboratîf du caran sterilîzasyona germahiya bilind)
Nîqaşên derxistina RNA
Du diyardeyên sereke yên têkçûna veqetandina RNA tevnvîsê
Hilweşîna RNA û bermahiyên nepakî yên di tevnvîsan de,di derbarê hilweşandinê de, ka em pêşî lê binihêrin ka çima RNA ku ji şaneyên çandinî tê derxistin bi hêsanî nayê hilweşandin.Reagentên derxistina RNA yên heyî hemî pêkhateyên ku bi lez RNase asteng dikin hene.Lîzatê bi şaneyên çandî ve zêde bikin, û bi hêsanî wê tevlihev bikin, hemî şan dikarin bi tevahî bi lîzatê re werin tevlihev kirin, û şaneyên bi tevahî lîz dibin.Piştî ku hucre têne lîz kirin, malzemeyên çalak ên di lîzatê de yekser RNase ya hundurîn asteng dike, ji ber vê yekê RNA saxlem dimîne.Yanî ji ber ku şaneyên çandiyî bi hêsanî û tam bi lîzatê re dikevin têkiliyê, ARN-ya wan bi hêsanî nayê rizandin;ji aliyê din ve, RNA di tevnê de bi hêsanî tê hilweşandin ji ber ku şaneyên di tevnê de ne hêsan e ku zû bi lîzatê re têkilî daynin.ji ber têkiliyek têr.Wiha,Bihesibînin ku rêyek heye ku dema ku çalakiya RNA-yê asteng bike rêyek heye ku tevne bibe şaneyek yekane, pirsgirêka hilweşandinê dikare bi tevahî were çareser kirin.
Avêtina nîtrojena şil rêbaza herî bi bandor e.Lêbelê, rêbaza şilkirina nîtrojena şil pir bi êş e, nemaze dema ku hejmara nimûneyan mezin e.Vê yekê tiştê herî baş ê din peyda kir: homojenîzator.EwhomojenîzatorRêbaz pirsa ku çalakiya RNase çawa tê asteng kirin berî ku şaneyên bi lîzatê re têkilî daynin nahesibîne, lê berevajî dua dike ku rêjeya têkçûna tevneyê ji rêjeya ku RNase ya hundurîn RN hilweşîne zûtir be.
Bandora homojenîzatorê elektrîkê çêtir e,û bandora homojenîzatorê camê kêm e, lê bi gelemperî, rêbaza homojenîzator nikare pêşî li diyardeya hilweşandinê bigire.Ji ber vê yekê, heke derxistin hilweşe, divê homojenîzatora elektrîkê ya orîjînal ji bo qirkirina bi nîtrojena şil were bikar anîn;divê homojenîzatorê camê ya orjînal bibe homojenîzatorek elektrîkî an rasterast bi nîtrojena şil were rijandin.Pirsgirêk hema hema 100% pêkan e.çareser bibin.
Pirsgirêka bermahiyên nepaqijiyê yên ku bandor li ceribandinên paşîn dike, ji hilweşandinê bêtir sedemên cihêreng hene, û çareserî bi heman rengî cûda ne.Di encamê de,heke di tevnvîsê de hilweşandin an nepaqijiyên bermayî hebin, divê rêbaza derxistinê/reagentê ya ji bo madeya ceribandinê ya taybetî were xweşbîn kirin.Ne hewce ye ku hûn nimûneyên xwe yên hêja ji bo xweşbîniyê bikar bînin: hûn dikarin hin heywanên piçûk ên mîna masî/mirîşk ji sûkê bikirin, beşa têkildar a materyalê ji bo derxistina RNA, û beşa din jî ji bo derxistina proteîn bistînin - bi dev, mîde û rûvî Ekstrakt bikin.
RNA-ya mebest a RNA-ya hatî derxistin ji bo ceribandinên şopandinê yên cihêreng tê bikar anîn, û pêdiviyên kalîteya wê cûda ne
Çêkirina pirtûkxaneya cDNA yekparçebûna RNAyê bêyî bermayiyên înhîbîtorên reaksiyona enzîmê hewce dike;Bakur ji bo bermahiyên bermayiyên reaksiyona enzîmê yekitiya RNA ya bilind û hewcedariyên kêmtir hewce dike;RT-PCR yekbûna RNA ya pir bilind hewce nake,lê reaksiyonên enzîman asteng dike.Pêdiviyên bermayî hişk in.Input encam diyar dike;her carê ku armanc bidestxistina RNA ya herî paqij e, ew ê mesrefa gel û pereyan bike.
Berhevkirin/Storage of Nimûne
Faktorên Tesîra Hilweşînê Dikin Piştî ku nimûne ji laşê zindî/an jîngeha mezinbûnê ya orîjînal derkeve, enzîmên endojen ên di nimûneyê de dê dest bi hilweşandina RNAyê bikin,û rêjeya hilweşandinê bi naveroka enzîmên endojen û germahiyê ve girêdayî ye.Bi kevneşopî, tenê du rê hene ku meriv bi tevahî çalakiya enzîma endogenous asteng bike: tavilê lysate zêde bikin û bi tevahî û bilez homojen bikin;bikin perçeyên piçûk û yekser di nîtrojena şil de bicemidin.Her du nêzîkatî hewceyê operasyona bilez e.Ya paşîn ji bo hemî nimûneyan maqûl e, lê ya berê tenê ji bo tevnên ku naveroka wan kêm şaneyan û enzîmên endojen hene û homojenkirina wan hêsantir e.Bi taybetî, tevna nebatê, kezeb, tîmus, pankreas, spîh, mêjî, rûn, tevna masûlkeyê, hwd. berî ku bidomin çêtirîn bi nîtrojena şil têne cemidandin.
Parçebûn û homojenkirina nimûneyan
Faktorên ku bandorê li hilweşandin û hilberînê dikin Parçebûna nimûneyê yeji bo homojenîzasyona bêkêmasî, ku ji bo serbestberdana tam û tam a RNA ye.Hucre bêyî ku werin şikandin rasterast dikarin homojen bibin.Tiştek tenê piştî ku were şikandin dikare homojen bibe.Hevîrtirşk û bakterî berî ku bibin homojen pêdivî ye ku bi enzîmên têkildar werin şikandin.Tiştên bi naveroka enzîma endojen kêmtir û homojenîzasyona hêsantir dikarin di lîzatê de ji hêla homojenîzatorê ve yekcar werin pelçiqandin û homojen kirin;tevna nebatan, kezeb, tîmus, pankreas, zirav, mêjî, rûn, tevna masûlkeyan û nimûneyên din, ew an di enzîmên endojen de pir in an jî bi hêsanî homojen nabin,ji ber vê yekê qutkirina tevn û homojenîzasyonê divê ji hev cuda bêne kirin.Rêbaza perçebûnê ya herî pêbawer û herî berhemdar rijandina bi nîtrojena şil e, û rêbaza herî pêbawer a homojenkirinê karanîna homojenkerek elektrîkê ye.Têbînîyek taybetî di derbarê rijandina bi nîtrojena şil de: Divê nimûne di tevahiya pêvajoya rijandinê de neyê şilkirin, ji ber ku enzîmên endojen di dema cemidandinê de bêtir kar dikin.
Hilbijartina lysate
Bandor li rehetiya xebitandinê û faktorên nepaqijiyên endojen ên mayî dike Çareseriyên lîzê yên ku bi gelemperî têne bikar anîn hema hema dikarin çalakiya RNase asteng bikin.Ji ber vê yekê, xala bingehîn a hilbijartina çareseriyek lîzê ev e ku meriv bi rêbaza paqijkirinê re hevber were hesibandin.Yek îstîsna heye:Nimûneyên bi naveroka enzîma endojen bilind têne pêşniyar kirin ku lîzatek ku fenolê tê de heye bikar bînin da ku şiyana neçalakkirina enzîmên endojen zêde bikin.
Hilbijartina rêbaza paqijkirinê
Faktorên ku bandorê li nepaqijiyên endojen ên mayî dikin, leza derxistinê Ji bo nimûneyên paqij ên mîna şaneyan, hema hema bi her awayê paqijkirinê yê li ber dest de, encamên têrker dikarin werin bidestxistin.Lê ji bo gelek nimûneyên din, nemaze yên ku bi astên bilind ên nepakî yên wekî nebat, kezeb, bakterî, hwd., Hilbijartina rêbazek paqijkirinê ya maqûl girîng e.Rêbaza paqijkirina sentrîfugal a stûnê xwedan leza derxistina bilez e û dikare bi bandor nepaqijiyên ku bandorê li reaksiyona enzîmatîk a paşîn a RNA dike, rake, lê ew biha ye (Foregene dikare kîtên lêçûn-bandor pêşkêşî bike, hûrguliyên bêtir bikirtîninvir);bikaranîna rêbazên paqijkirina aborî û klasîk, wek barîna LiCl, dikare encamên têrker jî bi dest bixe, lê dema xebatê dirêj e..
"Sê Dîsîplîn û Heşt Baldarî" ji bo Derxistina RNA
Dîsîplîna 1:Dawî li pîsbûna enzîmên biyanî bînin.
Têbînî 1:Bi tundî mask û destan li xwe bikin.
Têbînî 2:Divê lûleyên santrîfujê, serê tîpan, çîpên pîpetê, tankên elektroforezê, û bengehên ceribandinê yên ku beşdarî ceribandinê bûne bi tevahî werin avêtin.
Nîşe 3:Reajans/çareseriyên ku tev li ceribandinê dibin, nemaze av, divê bê RNase bin.
Dîsîplîna 2:Çalakiya enzîmên endogenous asteng bikin
Têbînî 4:Rêbazek homojenkirinê ya guncan hilbijêrin.
Nîşe 5:Lîzek guncan hilbijêrin.
Têbînî 6:Mîqdara destpêkê ya nimûneyê kontrol bikin.
Dîsîplîna 3:Armanca derxistina xwe zelal bikin
Têbînî 7:Digel ku her pergala lîzatê ku nêzî mîqdara destpêkê ya herî zêde ya nimûneyê dibe, rêjeya serkeftina derxistinê bi tundî dadikeve.
Têbînî 8:Pîvana aborî ya yekane ji bo derxistina RNA-ya serketî serkeftinek di ceribandinên paşîn de ye, ne berberî.
Top 10 Çavkaniyên Têkelbûna RNase
1. Tilî çavkaniya yekem a enzîmên biyanî ne, ji ber vê yekê divê destmal gelek caran li xwe bikin û werin guhertin.Digel vê yekê, divê mask jî bêne kirin, ji ber ku nefes jî çavkaniyek girîng a enzîman e.Feydeyek din a girtina maskek destikê parastina ceribandinê ye.
2. Tîpên pîpetê, lûleyên santrîfujê, pîpet - RNase bi tenê bi sterilîzasyonê nayê bêçalak kirin, ji ber vê yekê divê lûleyên pîpetê û lûleyên santrîfujê bi DEPC werin derman kirin, her çend wekî DEPC hatî derman kirin jî were nîşankirin.Çêtir e ku meriv pîpetek taybetî bikar bîne, berî ku bikar bîne, bi taybetî bi çolê, wê bi pembûyek alkolê ya 75% paqij bike;ji bilî vê, bawer bin ji bo bikaranîna a remover serê.
3. Av / tampon divê ji gemariya RNase bêpar be.
4. Bi kêmanî maseya testê divê bi 75% golên pembû yên alkolê paqij bibe.
5.RNaza endojen Hemû tevnvîz enzîmên endojen dihewîne, ji ber vê yekê cemidandina zû ya tevnvîsên bi nîtrojena şil rêya herî baş e ji bo kêmkirina hilweşandinê.Rêbaza hilanîna nîtrojena şil / rijandin bi rastî nerehet e, lê ew yekane rê ye ji bo tevnên bi astên bilind ên enzîmên endogenous.
6. Nimûneyên RNA Berhemên derxistina RNAyê dibe ku şopên gemariya RNase hebin.
7. Derxistina plasmîdê Derxistina plasmîdê gelek caran Rnase bikar tîne da ku ARNyê hilweşîne, û Rnase ya mayî jî divê bi Proteînaza K-yê were xwar û ji hêla PCI ve were derxistin.
8. Depokirina ARN-ê Ger di germahiya nizm de were hilanîn jî, mîqdarên şopa RNase dê bibe sedema hilweşîna ARNyê.Çareya herî baş a ji bo parastina demdirêj a RNA suspensionek xwê/alkolê ye, ji ber ku alkol di germahiyên nizm de hemî çalakiya enzîmatîk asteng dike.
9. Dema ku kation (Ca, Mg) van îyonan hebin, germkirina 80C bo 5 deqîqeyan dê bibe sedem ku ARN biqelişe, ji ber vê yekê ger hewce bike ku ARN were germ kirin, pêdivî ye ku di çareya parastinê de melzemeyek kelatê (1mM Sodyum Citrate, pH 6,4) hebe.
10. Enzîmên ku di ceribandinên paşerojê de têne bikar anîn, dibe ku ji hêla RNase ve were qirêj kirin.
10 Serişteyên ji bo Derxistina RNA
1: Zû çalakiya RNase asteng bike.Nimûne piştî berhevkirinê zû têne cemidandin, û RNase di dema lîzê de bi operasyona bilez tê neçalak kirin.
2: Ji bo tevna bi naveroka ribozîm a bilind rêbazek derxistina guncan hilbijêrin, û tevna rûnê çêtirîn e ku meriv rêbaza ku fenolê vedihewîne bikar bîne.
3: Qalîteya pêşbîniyê Bakurî hewce dike, avakirina pirtûkxaneya cDNA yekparçebûnek bilind hewce dike, û RT-PCR û RPA (assaya parastina Ribonuclease) ne hewceyê yekbûna bilind e.RT-PCR paqijiya bilind (bermayiyên enzîmê astengker) hewce dike.
4: Homojenîzasyona bêkêmasî mifteya başkirina hilberînê û kêmkirina hilweşandinê ye.
5: Yekbûna tespîtkirina elektroforeziya RNA-yê kontrol bikin, 28S: 18S = 2: 1 nîşanek bêkêmasî ye, 1: 1 jî ji bo pir ceribandinan tê pejirandin.
6: Rakirina ADNyê ji bo RT-PCR, analîza rêzê Ji bo rakirina ADNyê Dnase I çêtir e ku were bikar anîn.
7: Kêmkirina qirêjiya enzîmên biyanî - enzîm nikarin ji derve werin derxistin.
8: Dema ku asîda nukleî ya bi konsantresyona kêm tê berhev kirin, pêdivî ye ku reagentek hev-barînê were zêdekirin.Lê ji bo pêşîgirtina li hevberê ku enzîm û tevlêbûna DNA-yê dihewîne.
9: ARNyê bi tevayî bihelînin, ger hewce be, 5 hûrdeman li 65C germ bikin.
rêbaza hilanînê minasib
Ew dikare ji bo -20C ji bo demek kurt, û -80C ji bo demek dirêj ve were hilanîn.Pêngava yekem di baştirkirina hilberîna RNA de ev e ku meriv zanibe ku naveroka RNA ya nimûneyên cihêreng pir diguhere.Zêdebûna zêde (2-4 ug/mg) wek kezeb, pankreas, dil, pirbûna navîn (0,05-2 ug/mg) wek mejî, embrîyo, gurçik, pişik, tîmus, hêkdank, pirbûna kêm (<0,05 ug/mg) mg) wek mîzdank, hestî, rûn.
1: Ji bo berdana RN hucreyên lîz bikin - heke RNA neyê berdan, dê hilber kêm bibe.Homojenîzasyona elektrîkê ji rêbazên din ên homojenkirinê çêtir dixebite, lê dibe ku hewce bike ku bi rêbazên din re jî were hevber kirin, wek mêşkirina nîtrojena şil, digestiya enzîmatîk (Lysozyme / Lyticase)
2: Optimîzasyona rêbaza derxistinê.Pirsgirêkên herî mezin ên bi rêbazên fenol-based stratification ne temam û windabûna RNA ya qismî ne (supernatant bi tevahî nayê rakirin).Stratîfîkasyona netemam ji ber naveroka bilind a asîda nukleîk û proteînê ye, ku dikare bi zêdekirina mîqdara lîzatê ya hatî bikar anîn an kêmkirina mîqdara nimûneyê were çareser kirin.Gavek derxistina kloroformê li tevna rûnê hate zêdekirin.Wendabûna ARN dikare bi paş-pompkirinê an jî bi rakirina tebeqeya organîk a li dû santrîfugê kêm bibe.Pirsgirêka herî mezin a bi rêbazên santrîfujkirina stûnê re nimûneya zêde ye.
Serişteyên Derxistina Klasîk
1. Paqijkirina Fenolê: Bi qasî 1:1 Fenolê/Kloroformê 1-2 deqeyan bi xurtî tevlihev bikin.2 deqeyan bi leza bilind santrîfuj bikin.Bi baldarî supernatant (80-90%) derxînin.Qet nagihîjin qata navîn.Hêjmarek wekhev a çareseriya reaksiyonê dikare li Fenolê/Kloroformê were zêdekirin û supernatant were rakirin.Du supernatant dikarin ji bo barîna asîdên nukleîk bi hev re werin tevlihev kirin da ku hilberînê baştir bikin.Dema ku tevlihev bikin pir nerm nebin, û hewl nekin ku hemî supernatant jêbirin.
2. Şuştina bi 70-80% etanolê: Di dema şuştinê de divê asîda nukleîk bê sekinandin da ku xwêya bermayî were şûştin.Di heman demê de, tavilê piştî rijandina etanolê, çend saniyeyan bi leza bilind santrîfuj bikin, û dûv re bi pîpetê etanolê bermayî jê bikin.Piştî ku 5-10 hûrdeman li germahiya odeyê rawestin, hilweşînin.
11. Derxistina rêxistinên taybet
1. Tevna fibrous: Mifteya derxistina RNA ji tevna fîbrous wekî masûlkeyên dil/îskelet ew e ku tevne bi tevahî têk bibe.Van tevnhev xwedan şaneyek hindik in, ji ber vê yekê mîqdara RNA li ser yekîneya giraniya tevneyê kêm e, û çêtir e ku meriv bi qasî ku gengaz be mîqdara destpêkê bikar bîne.Pê bawer bin ku di bin şert û mercên cemidandinê de tevna bi tevahî hûr bikin.
2. Tiştên bi naveroka proteîn/rûn zêde: naveroka rûnê mêjî/nebatî zêde ye.Piştî derxistina PCI, supernatant flokên spî dihewîne.Pêdivî ye ku rûkalê ji nû ve bi kloroformê ve were derxistin.
3. Tiştên ku naveroka wan asîda nukleîk/rîbozîm zêde ye: di zikê/tîmusê de naveroka asîda nukleîk û rîbozîm zêde ye.Di bin şert û mercên cemidandinê de li dû homojenîzasyona bilez dikare rîbozîman bi bandor neçalak bike.Lêbelê, heke lysate pir zirav be (ji ber naveroka bilind a asîda nukleîk), derxistina PCI dê nikaribe bi rengek bi bandor birêkûpêk bike;Zêdekirina lysate bêtir dikare vê pirsgirêkê çareser bike.Gelek derxistina PCI-ê dikare bêtir DNA-ya bermayî jê bibe.Ger piştî lêkirina alkolê tavilê tîrêjek spî çêbibe, ew gemariya DNA nîşan dide.Ji nû ve derxistina bi PCI-ya asîdî piştî hilweşandinê dikare gemariya DNAyê rake.
4. Tevra nebatê: Tevra nebatê ji tevna heywanan tevlihevtir e.Bi gelemperî, nebat di bin şert û mercên nîtrojenê şil de têne ax kirin, ji ber vê yekê hilweşandina RNA ji hêla enzîmên endojen ve ne asayî ye.Ger pirsgirêka hilweşandinê neyê çareser kirin, hema hema bê guman ji ber nepakiyên ku di nimûneyê de hene pêk tê.Nepakîyên ku di gelek nebatan de hene dê bibe sedema bermayiyan, û sedema bermayiyan bi gelemperî ev e ku ev nepakî bi ARNyê re hin dişibin hev in: hûn diherikin û ez dirijînim, û hûn dişewitînin û ez vedigirim.Van taybetmendiyan diyar dikin ku ew înhîbîtorên enzîmê pir xurt in.
Heya nuha, reagentên derxistina RNA yên bazirganî dikarin bi verastkirinên piçûk hema hema li hemî tevnên heywanan werin adaptekirin, lê çend reagentên derxistina RNA yên bazirganî hene ku dikarin ji bo piraniya tevnên nebatê maqûl bin.Xwezî, Foregene dikare taybetî peyda bikekîtên derxistina RNA yên nebatê, me heyeKîta îzolasyonê ya ARN-a Total a nebatê, Plant Total RNA Kit Isolation Plus.Ya paşîn bi taybetî ji bo nebatên bi naveroka polysaccharîd û polyphenol-a bilind hatî çêkirin.Ji bo derxistina RNA, bertek ji bikarhênerên laboratîfê bi taybetî baş e.
12. Bandora cemidandin û helandina nimûneyê Dibe ku nimûneya cemidî mezintir be, û berî ku ji bo derxistina ARNyê were bikaranîn divê were birîn.Nimûne di dema birînê de dihelin (dibe ku qismî be).Nimûneyên cemidandî dibe ku berî derxistina ARNyê bêne pîvaz kirin, û bê guman di vê pêvajoyê de şilbûn çêdibe.Carinan, şilbûna nimûneyê jî di dema pêvajoya qirkirina nîtrojena şil de çêdibe;an jî nimûneya cemidandî rasterast li lîzatê bê rijandina nîtrojena şil tê zêdekirin, û helbûn dê bê guman berî homojenkirina tevahî çêbibe.Ceribandinan destnîşan kir ku tevna cemidî ji tevna teze bêtir meyldar e ku di dema germbûnê de hilweşîna ARNyê çêbibe.Sedema muhtemel: Pêvajoya cemidî-germkirinê strukturên di nav şaneyê de xera dike, û hêsantir dike ku enzîmên endojen rasterast bi ARNyê re têkevin têkiliyê.
13. Dadbarkirina kalîteya ARNyê Bi gelemperî, elektroforez ji bo dadbarkirina yekbûna ARNyê tê bikar anîn, û A260/A280 ji bo dadbarkirina paqijiya ARNyê tê bikar anîn.Di teorîyê de, ARN ya saxlem xwedî rêjeyek 28S:18S = 2,7:1 e, û piranîya daneyan li ser rêjeya 28S:18S = 2:1 radiweste.Rastî ev e ku hema hema yek ji RNA-ya ku ji nimûneyên ji bilî hucreyan hatî derxistin di rêjeyek 2:1 de nîne (ev bi karanîna Bioanalyzerê Agilent hate wergirtin).
Encamên elektroforez ên RNA ji hêla gelek faktoran ve têne bandor kirin, di nav de strukturên duyemîn, şertên elektroforez, barkirina nimûneyê, asta têrbûna ji hêla EB, hwd. Elektroforeza xwemalî bikar bînin da ku RNA-yê tespît bikin û Markerê DNA wekî kontrol bikar bînin.Ger 28S li 2kb û 18S li 0.9kb zelal bin, û 28S: 18S > 1, yekrêzî dikare hewcedariyên pir ceribandinên paşîn bicîh bîne.
A260/A280 nîşanek e ku bûye sedema gelek tevliheviyê.Berî her tiştî, pêdivî ye ku meriv wateya orîjînal a vê nîşankerê ji bo asîdên nukleîk zelal bike: RNA ya paqij, A260/280 wê = bi qasî 2.0.RNA-ya paqij 'sedem' e û A260/A280 = 2 'bandor' e.Naha her kes A260/A280 wekî 'sedemek' bikar tîne, difikire ku "heke A260/A280 = 2, wê hingê RNA paqij e", ku bi xwezayî dibe sedema tevliheviyê.
Heke hûn eleqedar in, hûn dikarin reagentek piçûk a ku pir caran di derxistinê de tê bikar anîn, wek fenol, guanidine isothiocyanate, PEG, hwd., li nimûneya RNA-ya xwe zêde bikin, û dûv re rêjeya A260/A280 bipîvin.Rastî ev e ku gelek reagentên ku ji bo derxistina RNA-yê têne bikar anîn, û her weha gelek nepakiyên di nimûneyê de, li dora A260 û A280 vedihewînin, bandorê li A260/A280 dikin.
Nêzîkatiya herî hînker a niha ev e ku nimûneyên RNA di navbera 200-300 nm de were şopandin.Kevirê ARN-ya safî van taybetmendiyan heye: xêz hevseng e, A230 û A260 du xalên vekêşanê ne, A300 nêzî 0, A260/A280 = derdora 2.0, û A260/A230 = dora 2.0 e.Ger daneyên şopandinê peyda nebin, divê rêjeya A260/A230 jî were destnîşankirin, ji ber ku ev rêje ji hilgirtina hemî nepakiyên ku bandorê li reaksiyona enzîmatîk dikin hesastir e.Rêzeya xêzikî ya cîhazê (0,1–0,5 ji bo A260) bigire.
Du diyardeyên kêrhatî yên din jî hene: dema ku A260/A280 di avê de were pîvandin, rêjeya wê bi qasî 0,3 kêmtir be;dema ku rêjeya ku di 10 mM EDTA de tê pîvandin ji ya ku di 1 mM EDTA de tê pîvandin bi qasî 0,2 zêdetir e.
Berhemên têkildar:
Çîn Çîn Çîn Çîn Çîn Çîn Çêker û Pêşkêşkarê Tevahiya RNA Îsolasyona Kit |Foregene (foreivd.com)
Rêzeya îzolekirina RNA - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)
Dema şandinê: Tîrmeh-15-2022
