(96-baş) Kit QuickEasy Cell Direct RT-qPCR - SYBR Kesk I
Danasîn
Ew(96-baş) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Kesk Ipêşkêş dikepergalek tampon a lîzê ya yektato zû ARN derdixeji şaneya çandîNimûneyên ji bo reaksiyonên RT-qPCR, ku dem-dixwe û kedkar ji holê radikePêvajoya paqijkirina RNA, û tenê 7 hûrdeman digire da ku şablona RNA-ya hewce bistîne.Ew5× Direct RT Mixû2× Direct qPCR Mix-SYBRpêşkêşkirin di qutîkê de dikarin bi lez ûbi bandor jimareya rast-a-demê bistîninEncamên PCR.
5× Direct RT Mix û 2× Direct qPCR Mix-SYBR xwedan tolerasyona înhîbîtor a bihêz in, û dikarin lîzata nimûneyê wekî şablonek ji bo veguheztina berevajî ya bikêr û zêdekirina taybetî bikar bînin.Reagent dihewîne Foregene Transcriptase Reverse Transcriptase ya yekta ku ji bo RNA ve girêdayî ye, û her weha Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl.2 , tampona reaksiyonê, optimîzator û stabîlîzkerê PCR, û dikare bi tampona lîzê re were bikar anîn da ku nimûneyê zû, bi hêsanî û rast tespît bike, û xwedan taybetmendiyên hesasiyeta bilind, taybetmendiya xurt û aramiya baş e.
Kit ji bo lîza mîkro-sîstema hucreyên çandî yên 96-baş tê armanc kirin, û xwedan yekrengî û hevrêziyek baş e;hêmanên kîtê 96 reaksiyonên lîzê, 96 reaksiyonên veguheztina berevajî û reaksiyonên 96 × 2 qPCR peyda dikin, ku dikarin ji bo karanîna yek-carî plakaya hucreyên 96-kanî bicivînin, ji qirêjiya ku ji ber vebûn, cemidandin û şilbûna dubare ya reagentan û xerakirina performansa reagentê vedigere.
pêkhateyên Kit
| Kit pêkhatî ( 50 μL sîstema lysis/20 μLRT sîstema reaksiyonê /20μL sîstema reaksiyonê qPCR) | DRT-03011 | Bingotin | |
| 96T | |||
| ParI | TamponCL | 5 ml | HûcreLysis |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| TamponST | 500 μL | ||
| Par II | DNAVemirok | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- BelaşddH2 O | 1.7 ml |
| |
| Manual | 1 perçe | 1 servîs | |
*: Reagenta lysis DNA Eraser di beşa II ya kîtê de ye;Hêmanên Hucreya Lysis, RT, û qPCR dikarin ji hev veqetînin.
Taybetmendî & avantajên
■Hêsan û bi bandor: Bi teknolojiya Cell Direct RT, nimûneyên RNA tenê di 7 hûrdeman de têne wergirtin.
■ Daxwaza nimûneyê piçûk e, bi qasî 10 şaneyan dikarin werin ceribandin.
■ Rêjeya bilind: ew dikare zû RNA di şaneyên ku di lewheyên 384, 96, 24, 12, 6-kaniyan de hatine çandin, tesbît bike.
■ DNA Eraser dikare bi lez genomên serbest rabike, bandorê li ser encamên ceribandinên paşîn pir kêm bike.
■ Pergala RT û qPCR ya optimîzekirî transkrîpsyona berevajî ya RT-PCR-ya du-gavekî bikêrtir û PCR-ya taybetîtir, û li hember astengkerên reaksiyona RT-qPCR berxwedêrtir dike.
sepanê Kit
Qada serîlêdanê: şaneyên çandî.
- RNA ku ji hêla lîza nimûneyê ve hatî berdan: tenê ji bo şablona RT-qPCR ya vê kîtê tê sepandin.
- Kit dikare ji bo mebestên jêrîn were bikar anîn: analîzkirina vegotina genê, verastkirina bandora bêdengkirina genê ya bi navbeynkariya siRNA, vekolîna dermanan, hwd.
Storage û Refê jiyana
Beşa I ya vê kîtê divê li 4 were hilanîn℃;Beşê II divê li -20℃ were hilanîn.
Foregene Protease Plus II divê li 4 were hilanîn℃, di -20℃ de necemidin.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman divê di -20 de were hilanîn℃di tariyê de;heke pir caran were bikar anîn, ew dikare li 4 jî were hilanîn℃ ji bo hilanîna kurt (di nav 10 rojan de bikar bînin).
Prensîbên sêwirana primera PCR-ya Real Time
Pêşî Primer û Reverse Primer
Ji bo Real Time PCR, sêwirana primer pir girîng e.Primer bi taybetmendî û karbidestiya zêdekirina PCR-ê ve girêdayî ne, û dikarin li gorî prensîbên jêrîn werin sêwirandin:
- Dirêjahiya destpêkê: 18-30 bp.
- Naveroka GC: 40-60%.
- Nirxa Tm: Nermalava sêwirana Primer, wekî Primer 5, dikare nirxa Tm ya aşîtê bide.Nirxên Tm yên primerên jorîn û jêrîn divê bi qasî ku pêkan nêzîk bin.Formula hesabkirina Tm jî dikare were bikar anîn: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Dema ku PCR tête kirin, germahiyek li jêr nirxa Tm ya primer a 5 °C bi gelemperî wekî germahiya paqijkirinê tê hilbijartin (zêdebûna têkildar a germahiya paqijkirinê dikare taybetmendiya reaksiyona PCR zêde bike).
- Primer û hilberên PCR:
- Dirêjahiya hilbera zêdekirina PCR-a sêwiranê bi tercîh 100-150 bp e.
- Pêdivî ye ku pêşmercên sêwiranê yên di qada strukturî ya duyemîn a şablonê de bi qasî ku gengaz were dûr xistin.
- Ji avakirina 2 an jî zêdetir bingehên temamker di navbera 3' dawîn a primerên jorîn û jêrîn de dûr bisekinin.
- Bingeha termînalê ya Primer 3' nikare bi 3 G an C yên paşîn ên din re hebe.
- Pîmer bixwe nikarin xwedan strukturên temamker bin, wekî din dê avahiyek porê çêbibe, ku bandorê li zêdekirina PCR bike.
- Pêdivî ye ku ATCG di rêza pêşîn de bi qasî ku gengaz be were belav kirin, û bingeha termînalê ya 3' divê wekî T were dûr kirin.
Pêvok1: Cell DirectRT-qPCR Kit component pakêta lêzêdekirina
1.Cell Lysis Çareseriya
| Çareseriya Lîza Hucreyê | |||
| pêkhateyên Kit (Pergala lîzê ya 24-kanî / baş) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Parez | Tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ParII | Eraser DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| pêkhateyên Kit (20 μl pergala reaksiyonê) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Bê ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| pêkhateyên Kit (20 μl pergala reaksiyonê) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 ml |
| RNase-Bê ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuals Instruction:
