Cell Direct RT qPCR Kit-Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Yek-gavekî qRT-PCR Kits Probe
Danasîn
Ev hilber pergalek tampon a lîzê ya yekta bikar tîne da ku zû RNA ji nimûneyên hucreyên çandî ji bo reaksiyonên RT-qPCR azad bike, pêvajoya paqijkirina RNA ya demxwer û kedkar ji holê rabike, û tenê 7 hûrdem ji bo bidestxistina şablona RNA ya hewce, bi 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ku ji hêla kit PCR ve hatî peyda kirin zû û bi bandor dikare encamên rastîn û bi bandor bi dest bixe.
5× Direct RT Mix û 2× Direct qPCR Mix-Taqman xwedan tolerasyona înhîbîtor a bihêz in û dikarin bi karanîna lîzata nimûneya ku wekî şablonek were pîvandin vegerandin û zêdekirina taybetî pêk bînin.Di reagentê de Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl heye.2, Tampona Reaksiyonê, PCR Optimizer û Stabilizer, ku dikare bi tampona lîzê re were bikar anîn da ku zû û bi hêsanî nimûneyan tespît bike, û xwedan taybetmendiyên hestiyar, taybetmendî û aramiyê ye.
Specifications
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
pêkhateyên Kit
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| pêkhateyên Kit Pergala Reaksiyonê ya 20μl qPCR | DRT-01021 | DRT-01022 | Not | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Par I | Tampon CL | 4 ml | 20 ml | Cell Lysis |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Tampon ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Par II | Eraser DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 ml | ||
| RNase-Bê ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Manual Instruction | 1 perçe | 1 perçe | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman dikare cûda were kirîn
Taybetmendî & avantajên
■Hêsan û bi bandor: Bi teknolojiya Cell Direct RT, nimûneyên RNA tenê di 7 hûrdeman de têne wergirtin.
■ Daxwaza nimûneyê piçûk e, bi qasî 10 şaneyan dikarin werin ceribandin.
■ Rêjeya bilind: ew dikare zû RNA di şaneyên ku di lewheyên 384, 96, 24, 12, 6-kaniyan de hatine çandin, tesbît bike.
■ DNA Eraser dikare bi lez genomên serbest rabike, bandorê li ser encamên ceribandinên paşîn pir kêm bike.
■ Pergala RT û qPCR ya optimîzekirî transkrîpsyona berevajî ya RT-PCR-ya du-gavekî bikêrtir û PCR-ya taybetîtir, û li hember astengkerên reaksiyona RT-qPCR berxwedêrtir dike.
sepanê Kit
Qada serîlêdanê: şaneyên çandî.
- RNA ku ji hêla lîza nimûneyê ve hatî berdan: tenê ji bo şablona RT-qPCR ya vê kîtê tê sepandin.
- Kit dikare ji bo mebestên jêrîn were bikar anîn: analîzkirina vegotina genê, verastkirina bandora bêdengkirina genê ya bi navbeynkariya siRNA, vekolîna dermanan, hwd.
Storage û Refê jiyana
Beşa I ya vê kîtê divê li 4 were hilanîn℃;Beşê II divê li -20℃ were hilanîn.
Foregene Protease Plus II divê li 4 were hilanîn℃, di -20℃ de necemidin.
Reagent 2×Direct qPCR Mix-Taqman divê di -20 de were hilanîn℃di tariyê de;heke pir caran were bikar anîn, ew dikare li 4 jî were hilanîn℃ ji bo hilanîna kurt (di nav 10 rojan de bikar bînin).
Prensîbên sêwirana primera PCR-ya Real Time
Pêşî Primer û Reverse Primer
Ji bo Real Time PCR, sêwirana primer pir girîng e.Primer bi taybetmendî û karbidestiya zêdekirina PCR-ê ve girêdayî ne, û dikarin li gorî prensîbên jêrîn werin sêwirandin:
- Dirêjahiya destpêkê: 18-30 bp.
- Naveroka GC: 40-60%.
- Nirxa Tm: Nermalava sêwirana Primer, wekî Primer 5, dikare nirxa Tm ya aşîtê bide.Nirxên Tm yên primerên jorîn û jêrîn divê bi qasî ku pêkan nêzîk bin.Formula hesabkirina Tm jî dikare were bikar anîn: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Dema ku PCR tête kirin, germahiyek li jêr nirxa Tm ya primer a 5 °C bi gelemperî wekî germahiya paqijkirinê tê hilbijartin (zêdebûna têkildar a germahiya paqijkirinê dikare taybetmendiya reaksiyona PCR zêde bike).
- Primer û hilberên PCR:
- Dirêjahiya hilbera zêdekirina PCR-a sêwiranê bi tercîh 100-150 bp e.
- Pêdivî ye ku pêşmercên sêwiranê yên di qada strukturî ya duyemîn a şablonê de bi qasî ku gengaz were dûr xistin.
- Ji avakirina 2 an jî zêdetir bingehên temamker di navbera 3' dawîn a primerên jorîn û jêrîn de dûr bisekinin.
- Bingeha termînalê ya Primer 3' nikare bi 3 G an C yên paşîn ên din re hebe.
- Pîmer bixwe nikarin xwedan strukturên temamker bin, wekî din dê avahiyek porê çêbibe, ku bandorê li zêdekirina PCR bike.
- Pêdivî ye ku ATCG di rêza pêşîn de bi qasî ku gengaz be were belav kirin, û bingeha termînalê ya 3' divê wekî T were dûr kirin.
Pêvok1: Cell DirectRT-qPCR Kit component pakêta lêzêdekirina
1.Cell Lysis Çareseriya
| Çareseriya Lîza Hucreyê | |||
| pêkhateyên Kit (Pergala lîzê ya 24-kanî / baş) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Parez | Tampon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ParII | Eraser DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| pêkhateyên Kit (20 μl pergala reaksiyonê) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-Bê ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| pêkhateyên Kit (20 μl pergala reaksiyonê) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 ml |
| RNase-Bê ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuals Instruction:
